UV-Vis（紫外-可见）光谱法是一种分析技术，测量分子在电磁波谱紫外区（190-400 nm）和可见光区（400-800 nm）的光吸收。它广泛用于定量分析、动力学研究以及分子电子跃迁的表征。

UV-Vis 吸收原理

当光穿过样品时，分子吸收能量与电子轨道间能隙匹配的光子，将电子从基态跃迁到激发态。每个波长处的光吸收量记录为吸收光谱，最大吸收波长（λmax）是每个发色团的特征值。比尔-朗伯定律（A = εcl）将吸光度（A）与摩尔吸光系数（ε）、光程（c）和浓度（l）相关联，实现定量分析。

仪器组成

UV-Vis 光谱仪由多个组件构成。氘灯提供紫外范围的光，钨卤素灯提供可见范围的光。单色器（衍射光栅或棱镜）选择窄带波长。样品室放置石英比色皿（用于紫外测量）或玻璃比色皿（用于可见光测量），检测器（光电倍增管或光电二极管阵列）将透射光转换为电信号。双光束仪器将光分为样品光束和参比光束，以校正溶剂和光源波动。

应用

UV-Vis 光谱用于核酸（A260）、蛋白质（A280）和酶动力学的定量分析；通过测量吸光度随 pH 的变化测定 pKa 值；药品、食品着色剂和水污染物的质量控制；以及过渡金属配合物和共轭有机化合物的表征。

优点与局限性

• 优点：快速、无损、所需样品体积小、成本相对较低。
• 局限性：只能测量发色物种；样品必须透明且无散射颗粒。