Apusan darah tepi (PBS) adalah teknik laboratorium mendasar yang memberikan konfirmasi visual dari hasil CBC otomatis dan memungkinkan deteksi kelainan morfologis yang tidak dapat diidentifikasi secara andal oleh alat analisis. Setiap ilmuwan laboratorium medik harus menguasai persiapan, pewarnaan, dan pemeriksaan sistematis apusan darah.
Persiapan Apusan Berkualitas
Wedge smear dibuat dengan menempatkan setetes kecil darah antikoagulan EDTA (atau darah kapiler) di dekat salah satu ujung kaca objek yang bersih. Slide penyebar kedua dipegang pada sudut 30–45°, dimasukkan kembali ke dalam tetesan sampai darah menyebar di sepanjang tepinya, dan kemudian dengan lembut didorong ke depan untuk membuat tepian berbulu. Apusan yang ideal memiliki transisi bertahap dari tebal ke tipis, dengan tepi berbulu menempati 1-2 cm dari panjang kaca objek. Apusan harus dikeringkan dengan cepat dengan cara mengayunkan kaca objek. Artefak umum termasuk lubang (darah berlemak, pengeringan lambat), ketebalan tidak teratur (tekanan penyebar tidak merata), dan ekor panjang (sudut penyebar terlalu rendah). Apusan kemudian difiksasi dalam metanol absolut selama 30 detik sebelum diwarnai.
Pewarnaan Wright-Giemsa
Pewarnaan tipe Romanowsky (kombinasi Wright, Giemsa, atau Wright-Giemsa) adalah standar untuk pewarnaan apusan darah. Noda ini mengandung warna biru B (basa, noda asam nukleat biru-ungu) dan eosin Y (asam, noda hemoglobin dan butiran eosinofilik oranye-merah). Protokol pewarnaan melibatkan membanjiri apusan yang telah difiksasi dengan pewarnaan Wright selama 1-2 menit, kemudian menambahkan larutan buffer selama 2-4 menit untuk meningkatkan pewarnaan diferensial, diikuti dengan membilas dengan air. Apusan yang diwarnai dengan benar menunjukkan sel darah merah merah muda-merah, inti dan RNA biru-ungu, dan warna granul yang berbeda. Pewarnaan berlebihan menghasilkan warna gelap dan berlumpur; memahami menghasilkan sel pucat dan berdiferensiasi buruk.
Pemeriksaan Apusan Sistematis
Pemeriksaan dimulai dengan daya rendah (10x objektif) untuk menilai kualitas keseluruhan, memilih area penghitungan yang optimal, dan mengidentifikasi kelainan pada distribusi WBC (efek tepi pada limfositosis atau CLL), gumpalan trombosit pada tepi berbulu, dan rouleaux atau aglutinasi sel darah merah. Penilaian diferensial dan morfologi WBC dilakukan pada perendaman minyak 50x atau 100x di zona penghitungan - area di mana sel darah merah sedikit tumpang tindih tanpa menumpuk. Setidaknya 100 WBC dihitung dan diklasifikasikan untuk diferensial manual. Pemeriksaan mencakup tiga aspek secara berurutan: estimasi dan morfologi trombosit, morfologi sel darah merah (ukuran, bentuk, warna, inklusi), serta morfologi dan diferensial sel darah putih.
Penilaian Morfologi RBC
Kelainan bentuk sel darah merah (poikilosit) memberikan petunjuk diagnostik. Sferosit (kecil, padat, tidak pucat di bagian tengah) menunjukkan sferositosis herediter atau AIHA. Schistosit (sel terfragmentasi) menunjukkan anemia hemolitik mikroangiopati (TTP, HUS, DIC). Sel sabit mengkonfirmasi penyakit sel sabit. Sel target terlihat pada talasemia, penyakit hati, dan penyakit HbC. Elliptosit menunjukkan eliptositosis herediter. Sel tetesan air mata (dakrosit) dengan sel darah merah berinti menunjukkan mielofibrosis atau infiltrasi sumsum. Akantosit (sel pacu) terjadi pada penyakit hati dan abetalipoproteinemia. Echinosit (sel duri) sering kali merupakan artefak tetapi dapat mengindikasikan uremia. Inklusi RBC termasuk basofilik stippling (keracunan timbal, talasemia), badan Howell-Jolly (pasca splenektomi, anemia megaloblastik), badan Pappenheimer (anemia sideroblastik, talasemia), dan cincin Cabot (anemia megaloblastik, mielodisplasia).
Penilaian Morfologi WBC
Di luar jumlah diferensial, gambaran morfologi sel darah putih juga dicatat. Granulasi toksik (butiran neutrofil kasar dan gelap), badan Döhle (inklusi sitoplasma biru pucat), dan vakuolasi menunjukkan infeksi atau peradangan. Neutrofil hipersegmentasi (> 5 lobus) menunjukkan anemia megaloblastik. Anomali Pelger-Huët (inti bilobed, pince-nez) adalah kondisi bawaan yang jinak tetapi dapat didapat pada myelodysplasia. Ledakan diidentifikasi berdasarkan rasio nuklir-sitoplasma yang tinggi, kromatin terbuka, nukleolus yang menonjol, dan sitoplasma basofilik, dan keberadaannya memicu penyelidikan lebih lanjut dengan flow cytometry. Limfosit atipikal (sitoplasma basofilik yang besar dan melimpah, inti yang menjorok ke dalam) merupakan ciri khas infeksi EBV.
Estimasi dan Morfologi Trombosit
Jumlah trombosit diperkirakan dari apusan dengan menghitung trombosit di 10 ladang minyak perendaman dan dikalikan dengan 15–20 × 10⁹/L. Ini memberikan pemeriksaan cepat terhadap penghitungan otomatis. Trombosit raksasa, trombosit abu-abu (kurang butiran), atau gumpalan trombosit dicatat. Kehadiran megatrombosit menunjukkan peningkatan pergantian trombosit seperti yang terlihat pada ITP.
Pelaporan dan Korelasi
Laporan PBS harus menggambarkan kualitas apusan, perkiraan jumlah sel, dan semua kelainan morfologi menggunakan terminologi standar. Temuan ini dikorelasikan dengan parameter CBC otomatis dan informasi klinis. PBS sering kali mendorong pengujian tambahan seperti elektroforesis hemoglobin, pengujian enzim RBC, flow cytometry, atau analisis sitogenetik.
