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分析型超速离心

July 22, 2026

分析型超速离心(AUC)是一种生物物理技术,通过在高离心力下的沉降行为表征溶液中的大分子。它可确定分子量、流体动力学形状、结合化学计量比和平衡常数,无需标准品或色谱柱校准。

进行两种互补实验。沉降速度法高速旋转样品并监测分子沉降时界面的径向移动。沉降平衡法使用较低速度,使沉降与扩散平衡,在平衡时产生指数浓度梯度。

沉降速度AUC提供沉降系数分布。沉降系数取决于分子质量和摩擦系数。摩擦系数反映分子形状。扩散系数从界面展宽获得。Svedberg方程关联这些参数。使用SEDFIT等程序中的连续c(s)分布模型进行分析,考虑扩散解卷积的沉降系数。

沉降平衡AUC提供与形状无关的分子量。平衡浓度梯度遵循径向位置的指数函数。对于单一理想物质,从ln c对r图的斜率确定分子量。多组分分析解析混合物并确定相互作用系统的缔合常数。

检测系统包括吸光度光学系统、瑞利干涉光学系统和荧光检测。吸光度检测具有波长特异性,适用于有色样品。干涉检测测量所有溶质的浓度变化,灵敏度更高。荧光检测对标记样品实现单分子灵敏度。

AUC应用包括蛋白质寡聚化表征、抗体聚集、蛋白质-核酸相互作用、脂蛋白异质性和纳米颗粒尺寸分布。该技术免标记,在天然溶液条件下操作。它被认为是确定大分子流体动力学性质的金标准。

样品要求包括光学透明性、适当的缓冲液密度和粘度以及足够的检测浓度。吸光度检测的典型浓度范围为0.1至10 mg/mL。