细胞凋亡检测

细胞凋亡（程序性细胞死亡）具有特定的形态和生化变化特征。几种互补的检测方法可以区分凋亡和坏死，并确定细胞死亡阶段。

Annexin V / 碘化丙啶染色是最常用的基于流式细胞术的凋亡检测方法。在早期凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内侧转移到外侧。Annexin V 是一种与荧光团（FITC、APC、PE）偶联的 PS 结合蛋白，可与暴露的 PS 结合。碘化丙啶（PI）或 7-AAD 只能进入膜受损的细胞（晚期凋亡/坏死）。

• Annexin V⁻ / PI⁻：活细胞
• Annexin V⁺ / PI⁻：早期凋亡细胞
• Annexin V⁺ / PI⁺：晚期凋亡/坏死细胞

TUNEL 检测（末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 切口末端标记）检测 DNA 片段化，这是晚期凋亡的标志。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将标记的 dUTP 添加到断裂 DNA 的 3′-OH 末端。通过荧光显微镜或流式细胞术进行检测。

Caspase 检测测量 caspase（凋亡的执行蛋白酶）的活性。荧光底物（如用于 caspase-3/7 的 DEVD-AMC）被活性 caspase 切割，释放荧光信号。Caspase-3/7 活性是使用最广泛的凋亡生化标志物。

细胞周期分析

细胞周期分析测量细胞在 G₀/G₁、S、G₂ 和 M 期的分布，揭示药物、营养物质或遗传变化对细胞分裂的影响。

流式细胞术 DNA 含量分析使用荧光 DNA 结合染料（PI、DAPI、Hoechst 33342）。固定和通透后的细胞被染色，测量荧光强度。强度与 DNA 含量成正比：

• G₀/G₁：2N DNA 含量（一个峰）
• S：介于 2N 和 4N 之间（峰之间的区域）
• G₂/M：4N DNA 含量（第二个峰）

每个时期的细胞百分比使用建模软件（ModFit、FlowJo Watson 算法）计算。

BrdU/EdU 脉冲追踪提供更详细的细胞周期信息。短时间的 BrdU 或 EdU 脉冲标记 S 期的细胞。经过追踪期后，通过分析细胞的 DNA 含量和 BrdU/EdU 掺入情况，揭示 S 期的进展速度和每个时期的持续时间。

**磷酸化组蛋白 H3（Ser10）**染色特异性标记有丝分裂细胞，提供 G₂/M 期标志物，可通过流式细胞术或显微镜区分 G₂ 和 M 期。