从混合样品中分离纯细菌培养物是任何微生物学工作流程的第一步——无论是用于临床诊断、食品安全检测还是研究。
培养基
细菌在提供碳、氮、矿物质和能源的营养丰富配方中生长。培养基按成分分类：
- 确定成分培养基：每种化学成分已知。用于代谢研究。
- 复合培养基：含有动物或植物材料消化物。LB 培养基是最常见的大肠杆菌复合培养基。
- 选择性培养基：含有抑制剂，抑制不需要的细菌，同时允许目标微生物生长。例如：MacConkey 琼脂、甘露醇盐琼脂。
- 鉴别培养基：含有指示剂以区分细菌类型。MacConkey 琼脂既有选择性又有鉴别性——乳糖发酵菌变为粉红色，非发酵菌保持无色。
- 富集培养基：补充血液、血清或生长因子以支持营养需求苛刻的微生物。血液琼脂是最常见的富集培养基。
划线分离
四区划线法从混合培养物中分离单菌落：
- 将接种环在火焰上烧至红热灭菌，然后通过接触无菌琼脂边缘冷却。
- 蘸取少量细菌样品。
- 在第一区以紧密的锯齿形图案划线。
- 灼烧接种环，冷却，从第一区拖入第二区。
- 在第三和第四区重复，各区之间灼烧。
- 倒置并在适当温度下孵育。
孵育后，在细胞密度最低的最后几个区的划线上出现分离的菌落。
涂布平板和倾注平板
涂布平板法使用无菌玻璃涂布器将稀释的细菌悬液均匀分布在琼脂平板表面。用于定量细菌计数。
倾注平板法在倒入平板前将稀释样品与熔化的琼脂混合。菌落在表面和琼脂内部都生长。适用于计数耐热微生物和检测低数量微生物。
培养条件
标准培养是在 37 °C 有氧条件下 18–24 小时。变化包括：
- 嗜二氧化碳：5–10% CO₂。
- 厌氧：使用厌氧罐或培养箱的无氧环境。
- 微需氧：低氧、高 CO₂。
- 嗜热：55–60 °C。
