Aislar un cultivo bacteriano puro de una muestra mixta es el primer paso en cualquier flujo de trabajo microbiológico — ya sea para diagnóstico clínico, pruebas de seguridad alimentaria o investigación.

Medios de Cultivo

Las bacterias se cultivan en formulaciones ricas en nutrientes que proporcionan carbono, nitrógeno, minerales y fuentes de energía. Los medios se clasifican por composición:

• Medios definidos (sintéticos): cada componente químico es conocido. Se usan para estudios metabólicos.
• Medios complejos: contienen digestos de material animal o vegetal (peptona, triptona, extracto de levadura). El caldo LB (Luria-Bertani) es el medio complejo más común para E. coli.
• Medios selectivos: contienen inhibidores (antibióticos, sales biliares, colorantes) que suprimen bacterias no deseadas mientras permiten el crecimiento del organismo diana. Ejemplos: agar MacConkey (selecciona bacterias Gram-negativas), agar sal manitol (selecciona estafilococos).
• Medios diferenciales: contienen indicadores que distinguen tipos bacterianos. El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial — los fermentadores de lactosa se vuelven rosados, los no fermentadores permanecen incoloros.
• Medios enriquecidos: suplementados con sangre, suero o factores de crecimiento para apoyar organismos fastidiosos. El agar sangre (5% de sangre de oveja) es el medio enriquecido más común.

Siembra por Estría

El método de estriado en cuadrantes aísla colonias individuales de un cultivo mixto:

1. Esterilice un asa de inoculación flameando hasta el rojo vivo, luego enfríe tocando el borde estéril del agar.
2. Tome una pequeña cantidad de la muestra bacteriana.
3. Siembre el primer cuadrante en un patrón de zigzag apretado.
4. Flamee el asa, enfríe y arrastre a través del primer cuadrante hacia el segundo.
5. Repita para el tercer y cuarto cuadrantes, flameando entre cada uno.
6. Incube invertido a la temperatura apropiada (37 °C para la mayoría de patógenos, 30 °C para aislados ambientales).

Después de la incubación, aparecen colonias aisladas a lo largo de las estrías de los cuadrantes finales donde la densidad celular es más baja.

Placa en Extensión y Placa en Vertido

La técnica de placa en extensión distribuye una suspensión bacteriana diluida uniformemente sobre la superficie de una placa de agar usando un esparcidor de vidrio estéril. Se utiliza para cuantificar recuentos bacterianos (UFC/mL).

La técnica de placa en vertido mezcla la muestra diluida con agar fundido antes de verterlo en la placa. Las colonias crecen tanto en la superficie como dentro del agar. Es útil para contar organismos tolerantes al calor y para detectar números bajos de organismos.

Condiciones de Incubación

La incubación estándar es a 37 °C en aire durante 18–24 horas. Las variaciones incluyen:

• Capnofílico: 5–10% de CO₂ (algunos patógenos, ej., Neisseria).
• Anaeróbico: atmósfera libre de oxígeno usando una jarra o cámara anaeróbica (ej., Clostridium, Bacteroides).
• Microaerofílico: bajo oxígeno, CO₂ elevado (ej., Campylobacter).
• Termofílico: 55–60 °C (Thermus aquaticus).