酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于微孔板的免疫检测方法，用于检测和定量特定的蛋白质、抗体、激素及其他分子。它结合了抗体的特异性和酶促检测的灵敏度。

ELISA的工作原理

1. 包被

用抗原或捕获抗体包被微孔板。目标分子通过被动吸附结合到表面。将板孵育过夜，然后洗涤以去除未结合的物质。

2. 封闭

向孔中加入含有无关蛋白质（如BSA或酪蛋白）的封闭溶液。这覆盖了板表面任何剩余的结合位点，防止后续步骤中的非特异性结合。

3. 检测抗体

加入与酶（最常见的是辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP）偶联的检测抗体。在夹心ELISA中，一抗与靶标结合，酶联二抗与一抗结合。

4. 信号产生

加入酶的底物。酶将底物转化为有色、荧光或化学发光产物。让反应进行设定的时间，然后终止。

5. 测量

使用酶标仪测量信号。信号强度与样品中目标分子的量成正比。使用已知浓度的标准曲线进行定量。

6. ELISA类型

• 直接ELISA：抗原被包被，酶联抗体直接检测它。
• 间接ELISA：抗原被包被，一抗结合，酶联二抗检测它。
• 夹心ELISA：捕获抗体被包被，抗原结合，检测抗体完成夹心。
• 竞争ELISA：信号随着目标浓度的增加而降低。