氧化酶（脱氢酶、氧化酶）和水解酶（磷酸酶、酯酶）是诊断酶组织化学中最重要的两类。它们在组织切片中的检测将代谢活动定位于特定细胞类型，并识别疾病中的功能异常。

氧化酶

NADH-四唑还原酶 (NADH-TR) 是诊断病理学中使用最广泛的氧化酶染色剂。 NADH-TR 是一种线粒体酶，可将电子从 NADH 转移到四唑盐 (NBT)，产生蓝色甲臜沉淀。该反应几乎存在于所有细胞中，但在氧化代谢较高的细胞中最为强烈：骨骼肌和心肌（I 型纤维）、近端肾小管、肝细胞。在肌肉病理学中，NADH-TR 表现出纤维类型分化（I 型纤维为深色，II 型纤维为浅色）、核心结构（中央核心疾病中的中央核心显示为未染色区域）、目标纤维（去神经支配中）和参差不齐的红色纤维（纤维外围的线粒体积累）。

琥珀酸脱氢酶 (SDH) 是克雷布斯循环的线粒体酶。其组织化学检测与NADH-TR相似，但使用琥珀酸作为底物。 SDH 活性比 NADH-TR 更稳定，用于证明线粒体分布。 SDH 缺乏的胃肠道间质瘤 (GIST) 和副神经节瘤中不存在 SDH，组织化学显示 SDH 活性丧失与 SDH 亚基突变相关。

细胞色素 c 氧化酶 (COX) 是线粒体电子传递链的复合体 IV。 COX 组织化学使用 DAB（二氨基联苯胺）作为电子供体，产生棕色反应产物。 肌肉活检中的 COX 阴性纤维表明线粒体 DNA 突变或缺失。联合 COX-SDH 组织化学（序贯染色）可识别 COX 阴性、SDH 阳性纤维，线粒体肌病的诊断标志。

水解酶

酸性磷酸酶 (ACP) 是一种溶酶体酶，pH 值 4.5-5.5 时具有活性。其组织化学检测使用萘酚AS-BI磷酸盐作为底物，六氮副玫瑰苯胺作为捕获试剂，产生红色反应产物。 ACP 存在于所有细胞的溶酶体中，但最丰富于：巨噬细胞（弥漫性红色细胞质染色）、破骨细胞（强烈活性，用作破骨细胞标记）、前列腺上皮。抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）对破骨细胞具有特异性，用于诊断骨佩吉特病和巨细胞瘤。 毛细胞白血病表现出强烈的抗酒石酸盐 ACP 活性（TRAP 阳性），尽管 CD103 和 BRAF V600E 的 IHC 已在很大程度上取代了 TRAP 组织化学。

碱性磷酸酶 (ALP) 是一种膜结合酶，在 pH 9.0-10.0 下具有活性。 ALP 组织化学使用萘酚 AS-MX 磷酸盐作为底物，使用 Fast Blue BB 作为捕获试剂，产生蓝色反应产物。 ALP 存在于：骨骼和软骨（成骨细胞）、肝脏（胆小管）、肾脏（近端小管）、肠（刷状缘）和胎盘。 ALP 是成骨细胞分化的标志物，用于评估代谢性骨病和骨折愈合中的骨形成。

非特异性酯酶 (NSE) 可检测水解短链脂肪酸酯的酯酶。标准底物是α-萘乙酸酯，被六氮副玫瑰苯胺（红棕色）捕获。 NSE 存在于：巨噬细胞（强、弥漫）、单核细胞、粒细胞（弱）和一些上皮细胞。 NSE 组织化学历来用于鉴定组织细胞肿瘤（粒细胞肉瘤、朗格汉斯细胞组织细胞增多症），但 CD68、CD163 和 CD1a 的 IHC 已在很大程度上取代了它。

诊断应用

肌肉活检： NADH-TR、COX、SDH、ATP 酶（pH 4.3、4.6 和 9.4）和 ACP 的组合可提供肌纤维类型、线粒体功能和溶酶体活性的全面表征。该组合对于诊断线粒体肌病、中央核心疾病、强直性肌营养不良和炎症性肌病至关重要。

骨和关节病理学： ALP（成骨细胞活性）、ACP/TRAP（破骨细胞活性）和 NADH-TR 可识别代谢性骨病、骨折愈合和骨肿瘤中的骨形成和骨吸收细胞。

肝活检： 小管 ALP（胆汁淤积）、ACP（溶酶体贮积病）和 NADH-TR（线粒体功能）提供与常规组织学互补的功能信息。

所有酶组织化学反应都需要严格的控制，阳性对照组织、底物遗漏和抑制剂对照，以确认特异性。 质量保证 程序记录了每次运行中酶活性的成功演示。