酶组织化学是对组织切片中酶活性的研究。与检测酶蛋白（无论活性还是非活性）的存在的免疫组织化学不同，酶组织化学检测功能活性：酶催化其特定反应的能力。这种功能信息通常比简单的蛋白质存在与疾病状态更相关。

原则

酶组织化学依赖于捕获反应，其中酶催化反应的产物在活性位点沉淀。将组织切片在含有酶特异性底物和捕获试剂的底物溶液中孵育。酶转化底物；反应产物被试剂捕获，形成光学显微镜下可见的不溶性有色沉淀。

反应必须是： 特异性（酶必须是在所用条件下唯一可以使用底物的酶）；产品必须是不溶的（以保留在活性部位）；并且沉淀物必须是可见的（有色、荧光或电子致密的超微结构定位）。

酶活性的固定和保存

固定是酶组织化学中最关键的变量。福尔马林和其他交联固定剂会抑制大多数酶，抑制程度取决于固定时间、温度和特定酶。 短暂固定（在冷福尔马林或福尔马林钙中固定 2-4 小时）可保留一些酶活性，同时保持足够的形态。 未固定的冷冻切片（速冻组织的低温切片）提供最高的酶活性，但形态较差。

冷固定（4°C）可减少酶失活。 丙酮固定（4°C，30-60 分钟）比福尔马林更好地保存许多酶。 无固定： 新鲜冰冻切片可用于任何固定剂完全失活的酶。后固定（首先孵育酶反应切片，然后固定）是另一种方法。

检测方法

同时捕获： 酶反应和捕获沉淀同时发生。底物和捕获试剂在孵育介质中混合。大多数水解酶（酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、酯酶）是通过使用重氮盐作为捕获试剂同时捕获来证明的。

孵育后偶联： 酶反应产生初级反应产物，然后在第二步中与捕获试剂偶联。该方法适用于初级产物不稳定或捕获试剂干扰酶活性的酶。

金属盐方法： 酶反应产物（例如，磷酸酶活性产生的磷酸盐）被金属离子（铅、钴、铜）捕获，形成不溶性电子密集金属盐。这些方法与光学显微镜和电子显微镜兼容。

四唑盐方法： 用于脱氢酶和氧化还原酶。该酶将电子转移到 NAD(P) 或 FAD，然后将四唑盐还原成有色的不溶性甲臜沉淀。不同的四唑盐（NBT、MTT、INT）产生不同颜色的甲臜（蓝色、紫色、红色）。

控制

对照对于验证酶组织化学反应至关重要。 阳性对照： 已知含有该酶的组织（肝脏含有大多数代谢酶，肾脏含有磷酸酶，骨骼肌含有脱氢酶）。 阴性对照： 相同的组织在没有底物的情况下与特定的酶抑制剂或热灭活的酶（煮沸切片）一起孵育。 抑制对照使用特定的酶抑制剂（例如用于酸性磷酸酶的氟化钠）确认反应是由目标酶引起的，而不是交叉反应酶引起的。

应用程序

酶组织化学用于肌肉病理学（通过 ATP 酶和 NADH-TR 反应进行肌纤维分型 ， 对于诊断肌病至关重要）、肝脏病理学（代谢性肝病中的酶缺乏）、肾脏病理学（肾小管损伤中的酶模式）和肿瘤病理学（骨肉瘤中的碱性磷酸酶、组织细胞肿瘤中的非特异性酯酶）。虽然 IHC 已经取代了许多酶组织化学应用，但酶组织化学在证明功能性酶活性方面仍然不可替代，特别是在肌肉和代谢疾病诊断中。 质量保证 包括使用阳性和阴性对照定期验证酶活性。