蛋白质印迹（也称为蛋白质免疫印迹）是一种用于检测复杂生物样品中特定蛋白质的实验室技术。虽然 SDS-PAGE 可以按大小分离蛋白质，但它无法区分不同的蛋白质——许多不同的蛋白质可能具有相同的分子量。Western 印迹法通过使用抗体来解决这个问题，这些抗体就像热追踪导弹一样，只与科学家想要研究的特定蛋白质结合。
Western 印迹法的工作原理
蛋白质经 SDS-PAGE 分离后，仍然被困在脆弱的凝胶中。Western 印迹法将它们转移到坚固的膜上，然后使用抗体进行检测。
- 转移
蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到薄而耐用的膜上（通常是硝酸纤维素膜或 PVDF 膜）。通过施加垂直于凝胶的电场，蛋白质被推出凝胶并牢固地粘附在膜表面，从而形成与原始分离图谱完全相同的复制品。
- 封闭
膜具有很强的粘性，会吸附任何接触到的蛋白质。为了防止抗体吸附在膜上的空隙处（这会造成杂乱的深色背景），需要将膜浸泡在“封闭”溶液中——通常是稀释的蛋白质混合物，例如脱脂奶粉或牛血清白蛋白 (BSA)。
- 抗体孵育
将膜与一种专门识别目标蛋白的一抗孵育。洗去未结合的一抗后，加入二抗。二抗可以识别一抗，通常与一种酶或荧光染料连接，作为信号分子。
- 检测
为了观察结果，加入一种化学底物，该底物与二抗上的酶反应，产生光（化学发光）或有色沉积物。这会在胶片或数码图像上形成一条暗带，不仅可以确认蛋白质的大小，还可以确定其确切种类和含量。
