Pengujian kerentanan antimikroba (AST) sangat penting dalam mikrobiologi klinis untuk memilih terapi antibiotik yang tepat dan memantau tren resistensi. Ini menentukan apakah suatu isolat bakteri rentan, sedang, atau resisten terhadap agen antimikroba tertentu.

Metode Difusi Disk (Kirby-Bauer).

Cakram kertas saring yang diresapi dengan konsentrasi antibiotik terstandar ditempatkan pada cawan agar yang diinokulasi dengan organisme uji pada kekeruhan tertentu (standar McFarland 0,5). Setelah inkubasi 16-24 jam, zona penghambatan diukur dalam milimeter dan dibandingkan dengan tabel breakpoint CLSI atau EUCAST. Hasilnya dilaporkan sebagai Rentan (S), Intermediate (I), atau Resisten (R), dengan ukuran zona berkorelasi berbanding terbalik dengan konsentrasi hambat minimum (MIC). Metode ini sederhana, murah, dan fleksibel (cakram antibiotik apa pun dapat diuji), namun tidak cocok untuk organisme yang tumbuh lambat atau rewel dan bersifat kualitatif daripada kuantitatif.

Metode Pengenceran Kaldu

Mikrodilusi kaldu dilakukan dalam pelat mikrotiter 96 sumur dengan pengenceran antibiotik dua kali lipat dalam kaldu Mueller-Hinton. Setiap sumur diinokulasi dengan sekitar 5x10^5 CFU/mL, dan MIC adalah konsentrasi antibiotik terendah yang menghambat pertumbuhan bakteri yang terlihat setelah 16-20 jam inkubasi. Makrodilusi kaldu menggunakan prinsip yang sama dalam tabung reaksi dan cocok untuk jumlah isolat yang lebih sedikit. Nilai MIC memberikan data kuantitatif yang berguna untuk analisis farmakokinetik/farmakodinamik (PK/PD) dan deteksi resistensi tingkat rendah.

Pengenceran Agar

Agar-agar yang mengandung pengenceran serial antibiotik diinokulasi dengan suspensi bakteri standar menggunakan replikator (Steers atau Denley multipoint inoculator). MIC dibaca sebagai konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan sepenuhnya, dan beberapa isolat (hingga 36) dapat diuji secara bersamaan pada satu pelat. Metode ini dianggap sebagai standar acuan untuk penentuan MIC, khususnya untuk organisme rewel dan anaerob.

Difusi Gradien (Etest)

Strip plastik dengan gradien antibiotik kontinu yang telah ditentukan di satu sisi dan skala pembacaan MIC di sisi lain ditempatkan pada pelat agar yang diinokulasi. Setelah inkubasi, zona penghambatan elips memotong strip pada nilai MIC, yang dibaca langsung dari skala. Metode ini menggabungkan kemudahan difusi disk dengan data MIC kuantitatif dan berguna untuk isolat tunggal atau ketika pengenceran kaldu tidak praktis.

Sistem Otomatis

Vitek 2 (bioMerieux), BD Phoenix, dan MicroScan WalkAway mengotomatiskan AST menggunakan mikrodilusi kaldu mini pada panel eksklusif dengan deteksi pertumbuhan berdasarkan kekeruhan atau fluoresensi. Hasil biasanya terlihat dalam 4-12 jam, jauh lebih cepat dibandingkan metode manual. Sistem otomatis mencakup aturan ahli terintegrasi untuk mendeteksi pola resistensi yang tidak biasa dan menyarankan tindakan perbaikan.

Pengujian Khusus

Deteksi beta-laktamase spektrum luas (ESBL) menggunakan uji disk kombinasi dengan sefotaksim dan seftazidime dengan dan tanpa asam klavulanat; peningkatan diameter zona sebesar ≥5 mm menegaskan produksi ESBL. Deteksi karbapenemase dilakukan dengan menggunakan metode inaktivasi karbapenem yang dimodifikasi (mCIM) dan CIM yang dimodifikasi EDTA (eCIM) untuk membedakan serin dan metallo-karbapenemase. Resistensi klindamisin yang dapat diinduksi (uji D) melibatkan penempatan cakram eritromisin dan klindamisin dengan jarak 15-20 mm; perataan zona klindamisin (berbentuk D) menunjukkan resistensi makrolida-lincosamide-streptogramin B (MLSB) yang dapat diinduksi. Penentuan MIC vankomisin dengan mikrodilusi kaldu atau Etest lebih disukai untuk mendeteksi S. aureus perantara vankomisin (VISA) dan VISA heterogen (hVISA).

Interpretasi dan Relevansi Klinis

Breakpoint klinis ditetapkan oleh CLSI (Institut Standar Klinis dan Laboratorium) dan EUCAST (Komite Eropa untuk Pengujian Kerentanan Antimikroba) berdasarkan distribusi MIC, data PK/PD, dan hasil klinis. Hasil dari Rentan (S) menunjukkan kemungkinan besar keberhasilan terapi dengan dosis standar; Resisten (R) menunjukkan kemungkinan besar kegagalan terapi; dan Menengah (I) menunjukkan kemanjuran yang tidak pasti, berpotensi memerlukan dosis yang lebih tinggi atau rute alternatif. Hasil AST memandu terapi yang ditargetkan, mengurangi penggunaan antibiotik spektrum luas dan memperlambat perkembangan resistensi. Data kumulatif AST (antibiogram) digunakan untuk epidemiologi lokal, pengambilan formularium, dan pengendalian infeksi.