抗菌药物敏感性测试 (AST) 在临床微生物学中对于选择适当的抗生素治疗和监测耐药性趋势至关重要。它确定细菌分离株是否对特定抗菌剂敏感、中间或耐药。

圆盘扩散（Kirby-Bauer）方法

将浸有标准浓度抗生素的滤纸盘放置在接种有规定浊度（0.5 麦克法兰标准）的测试微生物的琼脂平板上。孵育 16-24 小时后，以毫米为单位测量抑制区域，并与 CLSI 或 EUCAST 断点表进行比较。结果报告为敏感 (S)、中间 (I) 或耐药 (R)，区域大小与最小抑菌浓度 (MIC) 成反比。该方法简单、廉价且灵活（任何抗生素纸片都可以测试），但不适合生长缓慢或挑剔的生物，并且是定性而非定量的。

肉汤稀释方法

在 96 孔微量滴定板中进行肉汤微量稀释，在 Mueller-Hinton 肉汤中连续两倍稀释抗生素。每孔接种约 5x10^5 CFU/mL，MIC 是孵育 16-20 小时后抑制可见细菌生长的最低抗生素浓度。肉汤大量稀释在试管中使用相同的原理，适用于较少数量的分离株。 MIC 值提供了有助于药代动力学/药效 (PK/PD) 分析和低水平耐药检测的定量数据。

琼脂稀释

使用复制器（Steers 或 Denley 多点接种器）将标准化细菌悬浮液接种到含有连续稀释的抗生素的琼脂平板上。 MIC 被解读为完全抑制生长的最低浓度，并且可以在单个板上同时测试多个分离株（最多 36 个）。该方法被认为是 MIC 测定的参考标准，特别是对于挑剔的生物体和厌氧菌。

梯度扩散（Etest）

将一侧具有预定义的连续抗生素梯度、另一侧具有 MIC 读数刻度的塑料条放置在接种的琼脂板上。孵育后，椭圆形抑制区在 MIC 值处与试纸条相交，直接从刻度上读取。该方法将纸片扩散的便利性与定量 MIC 数据结合起来，对于单一分离株或肉汤稀释不切实际时非常有用。

自动化系统

Vitek 2 (bioMerieux)、BD Phoenix 和 MicroScan WalkAway 在专有面板中使用小型肉汤微量稀释，通过浊度或荧光进行生长检测，从而实现 AST 自动化。通常在 4-12 小时内即可获得结果，比手动方法快得多。自动化系统包括用于检测异常阻力模式并建议纠正措施的集成专家规则。

专业测试

超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL) 的检测使用头孢噻肟和头孢他啶（含或不含克拉维酸）的组合纸片试验；区域直径增加 ≥5 mm 证实 ESBL 的产生。使用改良碳青霉烯灭活方法 (mCIM) 和 EDTA 改良 CIM (eCIM) 进行碳青霉烯酶检测，以区分丝氨酸碳青霉烯酶和金属碳青霉烯酶。诱导性克林霉素耐药性（D 测试）涉及将红霉素和克林霉素圆片放置，间隔 15-20 毫米；克林霉素区域变平（D 形）表明可诱导大环内酯-林可酰胺-链霉素 B (MLSB) 耐药。通过肉汤微量稀释或 Etest 测定万古霉素 MIC 是检测万古霉素中间金黄色葡萄球菌 (VISA) 和异质 VISA (hVISA) 的首选方法。

解释和临床相关性

临床断点由 CLSI（临床和实验室标准研究所）和 EUCAST（欧洲抗菌药物敏感性测试委员会）根据 MIC 分布、PK/PD 数据和临床结果确定。敏感（S）结果表明标准剂量治疗成功的可能性很高；耐药（R）表示治疗失败的可能性很高；中间（I）表示疗效不确定，可能需要更高剂量或替代途径。 AST 结果指导靶向治疗，减少广谱抗生素的使用并减缓耐药性的发展。累积 AST 数据（抗菌谱）用于当地流行病学、制定决策和感染控制。