固定后，组织必须用支撑介质（通常是石蜡）渗透，以实现薄切片。自动化组织处理机将组织运送到连续的试剂浴中超过 8-24 小时，用石蜡代替水经历三个阶段：脱水、澄清和渗透。

组织处理器

现代组织处理机是封闭的、通风的仪器，可将装有组织盒的篮子移动通过一系列试剂站。 转盘式处理器（Leica ASP300、Thermo Excelsior）通过单独的试剂容器旋转篮子。 浸入和旋转处理器 将篮子降低到单个脱水缸中，该脱水缸按顺序填充和排出每种试剂。两种类型都在石蜡渗透过程中包括真空/压力循环，迫使蜡进入组织腔并去除残留空气。

处理器每次运行可容纳 100-400 个包埋盒。典型的过夜（14-16 小时）方案可处理所有常规活检和小切除术。较短（4-8 小时）的“快速”方案用于当天处理紧急标本、冰冻切片 残余物和小活检。根据组织类型和大小选择方案。

脱水

水与石蜡不混溶，必须完全除去。脱水使用浓度逐渐增加的分级乙醇（70%、80%、95%、100%）。从 70% 乙醇开始可防止渗透压休克和过度收缩。 100% 乙醇步骤是最关键的 - 任何残留的水都会阻止石蜡渗透并产生易碎、难以切片的块。无水乙醇含水<1%；应经常更改（每 50-100 次运行）以保持有效性。

脱水伪影：脱水不完全（颗粒状、软块）、过度脱水（小活组织检查过度收缩和硬化）以及水从乙醇转移到透明剂（浑浊的透明剂）。

清算

清除剂可与乙醇和石蜡混溶。它们取代组织中的乙醇并使样本半透明（因此“透明”，当折射率与透明剂匹配时，组织显得透明）。 二甲苯是通用清除剂 - 它性能良好，但需要作为危险溶剂（神经毒性、易燃）进行处理。 替代品包括异丙醇、基于柠檬烯的透明剂（HistoClear、Citrisolv）和邻苯二甲酸二丁酯。二甲苯替代品的清除速度较慢，并且可能会在组织中留下残留的清除剂。

透明伪影：不完全透明（块中不透明的白色斑块 - 组织仍然含有乙醇或水）和过度透明（过度硬化，特别是脂肪组织）。

石蜡渗透

清除剂逐渐被熔融石蜡（熔点56-60°C）替代。处理机在真空下将篮子移动通过两到三个石蜡浴，每次 1-2 小时。真空渗透（15-25 英寸汞柱）可去除组织腔中残留的清洁剂和空气，确保完全渗透。最终站的新鲜石蜡会产生最干净的石蜡块。

石蜡质量影响切片。石蜡添加剂包括DMSO（改善渗透）、树脂（改善硬组织切片）和塑料聚合物（改善色带连续性）。理想的石蜡具有较窄的熔化范围、对组织的良好粘附性以及冷却时最小的晶体形成。

协议选择

常规方案（过夜，14-16 小时）： 适用于大多数活检和小切除（厚度最多 4 毫米）。试剂时间：70%乙醇（1小时）、80%乙醇（1小时）、95%乙醇（1小时×2）、100%乙醇（1.5小时×2）、二甲苯（1.5小时×2）、石蜡（2小时×2真空）。

大样本方案（24 小时）： 适用于脂肪、致密或 >4 毫米的样本。更长的脱水步骤（每次 2 小时）、额外的二甲苯步骤（总共 6-8 小时）和延长的石蜡渗透（4 小时×2）。脂肪组织需要长时间的清除，因为脂肪在二甲苯中溶解缓慢。

快速方案（4-6 小时）： 用于小型紧急活检。使用更高的温度 (60°C)、更短的时间和更强的脱水剂（异丙醇）。可能会产生较硬的块但具有足够的形态。

解决处理问题

柔软或糊状块 - 脱水不完全或石蜡渗透不充分。通过熔化石蜡并用 100% 乙醇重复来重新处理组织。

脆块： 过度脱水、过热或长时间暴露在二甲苯中。减少脱水时间或降低烤箱温度。切片时向水浴中加入一滴润湿剂。

组织收缩： 正常加工会导致 10-15% 的线性收缩。过早施加高浓度乙醇会导致过度收缩 - 确保从 70% 开始分级脱水。

块中的白色、白垩区域 - 不完全清理（残留水或乙醇）。从清理阶段重新处理。

质量控制

通过检查块外观（均匀、半透明的石蜡，无白斑）、切片质量（光滑带，无颤动或撕裂）和H&E质量（清晰的核细节，无过度苍白）来监控加工质量。通过比重（乙醇）、折射率或测试组织处理运行来检查试剂纯度。处理器的定期维护，清洁试剂管线、更换密封件、校准温度和真空，可以防止批次故障。在质量保证日志 中记录所有试剂更换和维护。