冰冻切片是一种在患者麻醉下进行快速组织诊断的方法。它绕过了标准的 12-24 小时组织处理 周期，通过冷冻组织、在低温恒温器上切割切片、染色并在 15-20 分钟内让病理学家报告。结果直接影响手术过程，确定切缘是否清晰、淋巴结是否含有肿瘤、或者是否获得了足够的诊断组织。

低温恒温器

低温恒温器是一种旋转式切片机，封装在保持在 -20 至 -30°C 的冷藏柜中。将新鲜的、未固定的组织放置在带有包埋介质（OCT 化合物 - 最佳切割温度）的金属卡盘上，通过将卡盘浸入液氮中或将其放置在速冻棒上来快速冷冻，然后切成 4-10 µm 厚度的切片。在室温下将切片拾取到载玻片上，通过将冷冻切片熔化到玻璃上来立即固定组织。

冰冻切片的适应症

保证金评估是最常见的指示。在癌症手术中，外科医生需要知道切除边缘是否没有肿瘤。如果冰冻切片显示边缘有肿瘤，外科医生可以立即切除额外的组织，避免二次手术。

淋巴结评估用于黑色素瘤和乳腺癌的前哨淋巴结活检，确定肿瘤是否已转移，指导淋巴结清扫的范围。

组织识别确保样本包含诊断组织，对于甲状旁腺腺瘤（将其与甲状腺、淋巴结或脂肪区分开）、显微外科手术期间的神经识别以及确认已从深部病变中获取组织以进行永久切片尤其重要。

未知病变的分类可以指导立即的手术方法，区分炎症和肿瘤过程，以及在肿瘤内区分良性和恶性。

技术和染色

冰冻切片通常采用快速 H&E 方案染色：苏木精染色 30-60 秒，然后伊红染色 15-30 秒，并进行简短的脱水和透明化步骤。整个染色周期需要 2-3 分钟。一些实验室还使用甲苯胺蓝（用于肥大细胞和神经纤维）或亚甲基蓝（用于甲状旁腺鉴定）。

质量和限制

冰冻切片的质量本质上不如永久（石蜡）切片。冷冻过程会产生冰晶伪影，破坏细胞结构，使细胞核细节变得更粗糙、不那么清晰。切片厚度较大（石蜡为 6-10 µm，石蜡为 3-5 µm），从而降低了光学分辨率。脂肪组织和严重钙化的标本切片效果不佳。

由经验丰富的病理学家对适当的标本进行冰冻切片的诊断准确度为 94-98%。当感兴趣区域（例如淋巴结中的小肿瘤沉积物）不包含在冰冻切片块中时，最常出现假阴性。假阳性很少见，但可能是将反应性异型性解释为恶性肿瘤而导致的。有些诊断无法在冰冻切片上进行：许多肿瘤的明确分级、淋巴组织增生性疾病的诊断以及甲状腺肿瘤被膜侵犯的评估通常要推迟到永久切片。

冰冻切片特有的工件

冰晶在组织内表现为空的、有棱角的空间，扭曲了结构。与低温恒温器室中的缓慢冷冻相比，快速冷冻（液氮）可最大限度地减少冰晶的形成。

当组织太硬或太冷时会出现断裂线，导致切片在切割过程中破裂。稍微加热块或更慢地切割会有所帮助。

折叠和起皱在冰冻切片中比石蜡切片更常见，因为冰冻切片更厚且与载玻片的粘附性更差。

脂肪组织中的冷冻伪影使脂肪看起来像空的液泡，隔膜薄且破裂，限制了对脂肪病变的评估。

延期诊断和永久部分

冷冻切片后，将剩余的组织解冻，固定在福尔马林中，并常规处理以获得永久石蜡切片。永久切片诊断取代冰冻切片诊断。质量保证会议会审查冷冻诊断和永久诊断之间的差异。冰冻切片是一种咨询，而不是最终诊断，这种区别对于患者安全和法医学记录至关重要。