蛋白质印迹（也称为蛋白质免疫印迹）是一种实验室技术，用于检测复杂生物样品中的特定蛋白质。虽然 SDS-PAGE 按大小分离蛋白质，但它无法告诉您哪种蛋白质是哪种蛋白质 - 许多不同的蛋白质可以具有相同的重量。蛋白质印迹通过使用像热追踪导弹一样的抗体来解决这个问题，仅与科学家想要研究的一种特定蛋白质结合。

蛋白质印迹法的工作原理

在通过 SDS-PAGE 或通过[毛细管凝胶电泳](/guides/capillary-gel- electrophoresis) (CGE) 进行自动定量蛋白质大小分离后，它们仍然被困在脆弱的凝胶内。蛋白质印迹将它们转移到坚固的表面，并使用抗体进行检测。

1. 转账

蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到耐用的薄膜（通常是硝基纤维素或 PVDF）上。通过施加垂直于凝胶的电场，蛋白质被推出凝胶并牢固地粘附在膜表面，形成原始分离模式的精确复制品。

2. 阻塞

该膜非常粘，可以捕获它接触到的任何蛋白质。为了防止抗体粘附在膜上的空白处（这会产生杂乱的深色背景），将膜浸泡在“封闭”溶液中——通常是稀释的蛋白质混合物，如脱脂奶粉或牛血清白蛋白 (BSA)。

3. 抗体孵育

该膜经过一抗处理，旨在仅识别目标蛋白。洗掉任何未结合的一抗后，添加二抗。第二个抗体可识别第一个抗体，并且通常附着在充当信号的酶或荧光染料上。

4、检测

为了查看结果，添加了一种化学底物，该底物与二抗上的酶发生反应，产生光（化学发光）或有色沉积物。这会在胶片或数字图像上产生一条暗带，不仅可以确认蛋白质的大小，还可以确认其确切身份以及存在量。