Elektroforesis Gel Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide (SDS-PAGE) adalah teknik laboratorium canggih yang digunakan untuk memisahkan protein hanya berdasarkan berat molekulnya. Teknik analog berbasis kapiler, capillary gel electrophoresis (CGE), melakukan pengukuran protein berbasis SDS dalam format kapiler otomatis, menawarkan waktu analisis yang lebih cepat dan deteksi UV atau fluoresensi kuantitatif. Para ilmuwan sering kali berurusan dengan “sup protein”—campuran kompleks yang mengandung ratusan jenis protein berbeda. SDS-PAGE bertindak sebagai saringan molekuler, memungkinkan peneliti menguraikan campuran ini untuk mengidentifikasi protein tertentu, memeriksa kemurnian sampel, atau memverifikasi ukuran protein yang disintesis.
Cara Kerja SDS-PAGE
Prosesnya bergantung pada fakta bahwa protein, tidak seperti DNA, memiliki bentuk yang kompleks, terlipat, dan muatan alami yang bervariasi. Untuk memastikan ukuran adalah satu-satunya faktor yang mempengaruhi pergerakan mereka, percobaan ini menggunakan serangkaian langkah untuk “mengatur ulang” sifat protein.
- Denaturasi
Sampel protein dicampur dengan buffer yang mengandung SDS (deterjen kuat) dan dipanaskan. SDS bertindak sebagai pelurus kimia; itu membuka struktur 3D kompleks protein menjadi rantai linier. Yang terpenting, SDS melapisi protein dengan muatan negatif yang seragam, memastikan protein bergerak menuju elektroda positif terlepas dari muatan aslinya.
- Memuat
Sampel dimasukkan ke dalam lubang gel poliakrilamida—matriks sintetis yang bertindak sebagai penghalang mikroskopis. Sebuah “tangga protein” (campuran protein dengan berat molekul yang diketahui) biasanya dimasukkan ke dalam sumur pertama untuk dijadikan penggaris selama sisa percobaan.
- Migrasi
Arus listrik dialirkan melintasi gel. Karena protein bermuatan negatif, mereka bergerak menuju anoda (elektroda positif) di bagian bawah. Saat bergerak, protein yang lebih kecil menavigasi pori-pori gel dengan mudah dan bergerak cepat, sementara protein yang lebih besar menjadi kusut dan bergerak lebih lambat.
- Visualisasi
Setelah elektroforesis selesai, protein tidak terlihat dengan mata telanjang. Gel direndam dalam noda—paling sering Coomassie Brilliant Blue. Pewarna berikatan dengan protein, memperlihatkan serangkaian pita biru yang berbeda. Dengan membandingkan posisi pita-pita ini dengan tangga protein, para ilmuwan dapat menghitung berat molekul yang tepat dari setiap protein dalam sampel.
