桑格测序，也称为链终止测序，是一种用于确定DNA分子中核苷酸精确顺序的方法。由弗雷德里克·桑格于1977年开发，它仍然是验证DNA序列和检测突变的黄金标准。

桑格测序的原理

1. 设置反应

将待测序的DNA与DNA引物、DNA聚合酶、正常核苷酸（dNTP）以及少量荧光标记的双脱氧核苷酸（ddNTP）混合。四种ddNTP各用不同的荧光染料标记。

2. 链终止

反应从引物与模板DNA结合开始。DNA聚合酶通过添加dNTP来延伸引物。每当一个ddNTP代替dNTP被掺入时，链就停止延伸，因为ddNTP缺少进一步延伸所需的3’-羟基基团。

3. 片段生成

这个过程产生一系列长度不同的DNA片段混合物，每个片段终止于特定的核苷酸位置。终止ddNTP上的荧光标记标识了每个片段末端的碱基类型。

4. 毛细管电泳

将混合物加载到毛细管电泳仪中。片段在通过毛细管时按大小分离。激光激发荧光标记，检测器记录每个时间点经过的颜色。

5. 色谱图分析

仪器产生色谱图——一系列代表核苷酸序列的彩色峰。从色谱图中读取序列，通常从最短片段到最长片段，得到完整的DNA序列。