肌肉和神经活检是神经肌肉疾病的重要诊断工具。与常规外科病理学标本不同，它们需要专门处理，新鲜组织必须立即进行冷冻切片和酶组织化学处理，并且必须准备平行样品用于石蜡包埋和电子显微镜检查。

肌肉活检：适应症和选择

肌肉活检适用于：不明原因的无力（近端>远端）、肌酸激酶（CK）升高、肌病或神经源性肌电图表现、疑似炎症性肌病（皮肌炎、多发性肌炎、包涵体肌炎）、疑似肌营养不良、疑似代谢性肌病（线粒体、糖原储存、脂质储存）和先天性肌病。

根据临床参与和肌电图结果选择活检部位。 股外侧肌（股四头肌）是最常见的部位 - 易于接近，代表近端肌肉，并且具有正常值的良好特征。 三角肌用于近端上肢无力。 肱二头肌是另一种选择。活检应取自中度受影响的肌肉：终末期肌肉（严重萎缩、脂肪替代）提供的诊断信息很少。该部位最近不得接受过肌电图针刺（针外伤造成的伪影）。

肌肉活检处理方案

标本是新鲜收到的，用盐水湿润的纱布保持湿润。在解剖显微镜下，肌纤维呈纵向排列。将样本分为：冷冻切片（最大部分，5-8 mm × 5 mm）- 安装在 OCT 化合物中的软木盘上，定向用于横截面，并在液氮中冷却至 -160°C 的异戊烷中速冻。 石蜡（3-5 毫米片）- 固定在福尔马林中，用于常规组织学和 IHC。 电子显微镜（1-2 毫米片，纵向）- 固定在 2.5% 戊二醛中。 生物化学（可选，10-20 毫克）- 快速冷冻用于酶分析或基因测试。

将冷冻块在 -25°C 的低温恒温器中切成 8-10 µm 的切片。标准的冰冻切片组包括：H&E、改良 Gomori 三色、pH 9.4、4.6 和 4.3 的 ATP 酶、NADH-TR、COX、SDH、酸性磷酸酶、油红 O（中性脂质）、PAS（糖原）和非特异性酯酶。

冰冻切片酶组织化学

不同 pH 水平下的 ATP 酶反应必须在未固定的冰冻切片上进行，因为固定会使肌球蛋白 ATP 酶失活。反应为：在 pH 4.3（I 型暗、II 型光）、pH 4.6（I 型暗、IIA 光、IIB 中间）和 pH 9.4（I 型光、II 型暗）预孵育。这些区分I 型（慢肌纤维，氧化）和II 型（快肌纤维，糖酵解）及其亚型。正态分布是棋盘模式，姿势肌以 I 型为主，相位肌以 II 型为主。

NADH-TR、COX 和 SDH 必须在切片后 24-48 小时内对冷冻切片进行 - 酶活性会随着储存而下降。 阳性对照（已知正常肌肉）与每批一起运行。

石蜡切片和 IHC

将福尔马林固定、石蜡包埋的肌肉切成 4-5 µm 的切片，并用 H&E、LFB-PAS 和刚果红染色。 肌营养不良蛋白（杆结构域、N 末端、C 末端和脱落对照）的 IHC 可诊断杜兴/贝克肌营养不良症。 肌聚糖（α、β、γ、δ），突变导致肢带型肌营养不良症。 ** Dysferlin**： 突变导致 Miyoshi 肌病和 LGMD2B。 MHC IHC： 在炎症性肌病（皮肌炎、多发性肌炎）中上调。 MxA IHC： 在皮肌炎（束周模式）中 I 型干扰素上调。

神经活检

腓肠神经活检是最常见的神经活检，腓肠神经是纯粹的感觉神经，其切除只会导致脚外侧轻微的感觉丧失。适应症包括：疑似血管炎性神经病、遗传性神经病（夏科-马里-图思病）、淀粉样神经病、炎性神经病（结节病，CIDP）和贮积病。

样本（2-3 厘米）经过以下处理：石蜡： H&E、LFB-PAS、刚果红、IHC（神经丝、MBP、CD68、CD3、CD20）。 冷冻： ATP 酶（用于纤维类型）、NADH-TR、酸性磷酸酶。 梳理纤维： 分离并安装 30-50 根单独的纤维，用于评估轴突变性（髓磷脂卵泡）和节段性脱髓鞘（髓鞘薄或缺失）。 电子显微镜： 量化有髓纤维密度、无髓纤维损失，并识别特定异常（伴有压力性麻痹的遗传性神经病中的黄斑、脱髓鞘神经病中的洋葱球、轴突萎缩）。

质量控制

所有神经肌肉活检技术都需要严格的质量控制。必须评估冰冻切片的冰冻伪影（冰晶空泡 - 表示缓慢冰冻；冰冻时组织应是透明的）。酶组织化学反应必须在阳性对照上显示出预期的纤维类型模式。肌营养不良蛋白的 IHC 需要已知的正常对照和肌营养不良蛋白缺陷对照。建议执行这些专业技术的实验室参与神经肌肉 EQA 计划。