La manipulación precisa de líquidos es la operación manual más frecuente en cualquier laboratorio. Los errores en esta etapa se propagan a través de cada paso subsiguiente, haciendo que la técnica de pipeteo y la preparación de soluciones sean críticas para la reproducibilidad.

Principios de Pipeteo

Las pipetas de desplazamiento de aire funcionan creando un colchón de aire entre el pistón y el líquido. El volumen se ajusta mecánica o digitalmente, y el pistón desplaza un volumen correspondiente de aire para aspirar o dispensar líquido.

Para un pipeteo preciso, sostenga la pipeta verticalmente durante la aspiración. Sumerja la punta 2–4 mm por debajo del menisco para volúmenes de microlitros, más profundo para volúmenes mayores. Presione el émbolo hasta el primer tope, aspire el líquido lenta y suavemente, luego retire la punta a lo largo de la pared del recipiente. Dispense presionando hasta el primer tope, pause, luego presione hasta el segundo tope para expulsar cualquier líquido restante.

Errores Comunes de Pipeteo

• Prehumedecimiento: aspirar y dispensar el líquido 2–3 veces antes de la transferencia real humidifica el colchón de aire y reduce la pérdida por evaporación.
• Efectos de temperatura: el colchón de aire se expande o contrae con la temperatura. Tanto la pipeta como el líquido deben estar a temperatura ambiente.
• Líquidos viscosos: el pipeteo inverso (presionar hasta el segundo tope para aspirar, dispensar hasta el primer tope) mejora la precisión para soluciones viscosas o espumosas.
• Selección de puntas: use la punta correcta para la marca de la pipeta. Las puntas de baja retención reducen la pérdida de muestra para proteínas y detergentes.

Preparación de Soluciones

Las soluciones porcentuales masa/volumen se preparan disolviendo una masa pesada de soluto en disolvente y llevando al volumen final. Las soluciones molares se preparan calculando los moles a partir del peso molecular, disolviendo y ajustando al volumen en un matraz aforado.

Siempre añada el soluto a un volumen parcial de disolvente, agite para disolver, luego lleve a la marca final. Nunca añada disolvente a soluto seco en un matraz aforado — el volumen podría excederse.

Diluciones Seriadas y de Existencias

Una solución madre es una solución concentrada que se diluye a la concentración de trabajo. El factor de dilución es la relación entre el volumen final y el volumen de alícuota:

C₁V₁ = C₂V₂

Las diluciones seriadas son una serie de diluciones escalonadas donde cada paso diluye por un factor constante (típicamente 10 veces o 2 veces). Esta es la forma más eficiente de producir un rango de concentraciones logarítmico para curvas estándar, ensayos de CMI o pruebas de citotoxicidad.

Al preparar una serie de diluciones, mezcle completamente en cada paso y cambie la punta de la pipeta entre transferencias para evitar el arrastre.