苏木精和伊红 (H&E) 是组织病理学中使用最广泛的染色剂，几乎适用于每个诊断组织切片。了解其化学成分、配方变化和常见问题对于生产始终如一的高质量诊断幻灯片 至关重要。

苏木精化学

苏木精是从圆木树 (Haematoxylon Campechianum) 的心材中提取的天然染料。它本身并不是一种染料，它必须被氧化成活性着色剂苏木因。暴露于空气和光线（成熟）时会自然发生氧化，或使用化学氧化剂（碘酸钠、氧化汞）人为地发生氧化。苏木因与金属媒染剂（铝、铁、钨）结合，形成有色漆复合物，与组织成分结合。

明矾苏木素（Harris、Gill、Mayer、Gill II）使用铝盐作为媒染剂并将细胞核染成蓝色。哈里斯苏木素以氧化汞为氧化剂熟成；它可以产生清晰的核细节，但在使用前需要过滤以去除沉淀的汞。吉尔苏木精使用碘酸钠作为化学氧化剂，无需熟化即可使用 - 它更稳定并且产生一致的结果。迈尔苏木精类似，但更稀释，需要更长的染色时间。

曙红化学

曙红是一种呫吨染料，有两种形式：曙红 Y（淡黄色，最常见）和 曙红 B（淡蓝色）。曙红 Y 是水溶性的，可在水溶液或醇溶液中使用。它是一种酸性染料，可结合碱性（阳离子）组织成分，细胞质蛋白、胶原蛋白、红细胞和分泌颗粒。曙红溶液通常含有乙酸，以增强红细胞染色并防止胶原蛋白过度染色。

H&E 染色方案

自动化 H&E 染色机流程通过顺序浴进行滑动：脱蜡（二甲苯，3 次变化）、水合（分级乙醇 100% 至 70%，然后是水）、苏木精（3-8 分钟，具体取决于配方和所需强度）、上蓝（斯科特自来水或氨水，在碱性 pH 值下将苏木精从红色变为蓝色）、曙红 (1-3分钟）、脱水（分级乙醇 70% 至 100%）、透明（二甲苯）和 用永久封固剂盖玻片。自动染色机的总循环时间约为 30-45 分钟。

H&E 故障排除

核染色苍白或微弱： 苏木精可能已耗尽（更换）、媒染剂浓度可能较低或染色时间不足。检查苏木精是否已被氧化超过其使用寿命（过度成熟的苏木精会变成深棕色并且染色效果不佳）。骨标本的过度脱钙也会减少核嗜碱性粒细胞增多。

细胞核浑浊或染色过度： 苏木精染色时间太长，上蓝步骤不足，或苏木精溶液浓度太高。与太厚的切片厚度（切片应为 3-5 µm）区分开来。

曙红压倒苏木精： 曙红浓度过高，曙红 pH 值太酸性，或苏木精太弱。减少曙红时间或增加苏木精时间。整个切片中伊红强度的变化表明组织处理不均匀。

过度蓝色调： 酸性酒精（70% 乙醇中的 1% HCl）分化不足，或曙红时间不足。检查酸性酒精是否已耗尽。

核和细胞质染色均较弱 - 切片厚度太薄（小于 3 µm）、组织在福尔马林中过度固定或脱蜡不充分（二甲苯残留在苏木精水溶液中）。

质量控制

H&E 的每日 QC 包括对照载玻片（具有已知细胞核和细胞质细节的组织 - 扁桃体或结肠）、评估核/细胞质对比度、整个载玻片的均匀性、无沉淀物以及正确的盖玻片（无气泡）。记录质量控制结果和纠正措施。 H&E 溶液应按计划更换（苏木精每 1-2 周或在 500-1000 张玻片后更换；伊红每 1-2 周更换一次）。染色设备的定期维护，清洁架子、检查液位、校准计时器，可以防止批次故障。