组织病理学是对病变组织进行显微镜检查。在病理学家评估样本之前，组织必须经历一系列准备步骤，以保留结构、硬化样本以进行切割，并产生足够薄以传输光的切片。最终诊断的质量直接取决于处理和切片的质量。

固定

固定通过交联蛋白质和灭活降解酶来保留组织结构。最常见的固定剂是 10% 中性缓冲福尔马林 (NBF)，这是一种 3.7% 的甲醛溶液，可在氨基之间形成亚甲基桥，稳定[蛋白质结构](/guides/ Protein-Structure.html)，而不会过度收缩。固定时间取决于组织大小，典型的活检需要 6-24 小时，而较大的标本可能需要 24-48 小时。固定不足会使组织容易自溶并产生染色不良的切片；过度固定会导致过度交联，从而掩盖免疫组织化学抗原。其他固定剂包括戊二醛（用于电子显微镜）、Bouin 溶液（用于内分泌组织）和酒精固定剂（用于冷冻切片的快速处理）。

处理

固定后，在切片之前必须用固体支持介质（通常是石蜡）渗透组织。处理过程在自动组织处理机中进行，历时 12-24 小时，分阶段进行：

脱水 使用分级乙醇（70%、80%、95%、100%）去除组织中的水分，以防止变形。不完全脱水会阻止蜡渗透并导致切片伪影。

清除用与酒精和石蜡混溶的有机溶剂代替乙醇。二甲苯是最常见的清除剂；它使组织半透明并为渗透做好准备。

渗透 在真空烘箱中用熔化的石蜡代替清洁剂，确保完全渗透整个组织块。真空可以去除气泡，否则会导致切片出现孔洞。

嵌入

包埋将浸润的组织定向在石蜡块中以进行切片。将组织放入金属模具中，覆盖上熔化的蜡，并在冷板上冷却至固体。正确的方向至关重要：大多数活检组织都是嵌入的，以便为切片机刀片提供最大的横截面积。小或碎片样本（针活检、细胞学中的细胞块）在处理前通常用透镜纸包裹或嵌入琼脂中，以防止丢失。

切片术

切片是在旋转式切片机上进行的，该切片机以精确的增量推进石蜡块，对于常规组织学，通常为 3-5 µm。切片带漂浮在热水浴 (40-45°C) 上以压平皱纹，然后收集到载玻片上。影响切片质量的因素包括刀片状况（定期更换一次性刀片）、切片温度（在冰上冷却切片可改善脂肪组织的切片）和切割速度（缓慢、均匀的行程可产生最好的条带）。

安装后，将切片在热板或烘箱中干燥以确保粘附力。随后的染色（最常见的是 H&E ， 苏木精和伊红）可揭示细胞核和细胞质细节，以便进行显微镜评估。

常见文物

刀痕表现为切片机刀片上刻痕的平行刻痕线；通过对硬组织使用新鲜的刀片边缘可以最大限度地减少它们。

压缩发生在块体太热或刀片变钝时，导致截面比块体面短。冷却块或更换刀片可以解决此问题。

颤动（粗带和细带交替）是由切片机中的振动或松动的块引起的 - 块必须牢固地固定在卡盘中。

断面的褶皱和皱纹是由于水浴上漂浮不当或过热造成的；在水中加入一滴清洁剂可以降低表面张力。

漂浮物是来自其他病例的污染水浴的组织碎片 - 过滤水浴并每天更换可防止交叉污染。

气泡是由于加工过程中石蜡渗透不完全而产生的，使空气滞留在组织中。可能需要在真空下进行再处理。

质量控制

应检查每张染色载玻片的切片厚度（均匀的 3-5 µm）、无折叠和撕裂、组织的完整呈现以及正确的标记。在病理学家检查病例之前，必须重新切割不充分的切片。正确的处理和切片是准确的组织病理学诊断和免疫组织化学、原位杂交 和数字病理学等下游技术的先决条件。