La detección de anticuerpos (prueba de antiglobulina indirecta, IAT) y la compatibilidad cruzada son procedimientos esenciales de compatibilidad previos a la transfusión. Estas pruebas detectan anticuerpos clínicamente significativos en el plasma del paciente que podrían causar reacciones transfusionales hemolíticas o enfermedad hemolítica del feto y del recién nacido.
La prueba de antiglobulina indirecta (IAT)
El IAT detecta anticuerpos eritrocitos inesperados en el plasma del paciente. El plasma del paciente se incuba con glóbulos rojos de detección de reactivos de fenotipos de antígenos conocidos (normalmente dos o tres conjuntos de células que cubren antígenos clínicamente significativos, incluidos D, C, c, E, e, K, k, Fyᵃ, Fyᵇ, Jkᵃ, Jkᵇ, Leᵃ, Leᵇ, M, N, S, s, P1). Después de la incubación a 37°C para permitir la unión del anticuerpo, las células se lavan para eliminar las inmunoglobulinas no unidas. Se añade globulina antihumana (AHG, reactivo de Coombs), que une los anticuerpos IgG unidos a las células, provocando aglutinación si hay anticuerpos presentes. La IAT se puede realizar en tubos, columnas de gel (microcolumnas) o métodos de fase sólida; el gel y la fase sólida ofrecen una estandarización y sensibilidad mejoradas.
Identificación de anticuerpos
Cuando la prueba de anticuerpos es positiva, la identificación se realiza analizando el plasma del paciente frente a un panel de 11 a 16 glóbulos rojos fenotipados. El patrón de reactividad se analiza para determinar la especificidad del anticuerpo. Pueden estar presentes múltiples anticuerpos simultáneamente, lo que requiere una exclusión cuidadosa. Las características de los anticuerpos comunes clínicamente significativos incluyen: anti-K (IgG, fuerte respuesta anamnésica), anti-Fyᵃ (IgG, efecto de dosificación), anti-Jkᵃ (IgG, difícil de detectar, asociado con reacciones hemolíticas retardadas), anti-M (a menudo IgM, reactivo al frío, generalmente clínicamente insignificante a 37°C) y anti-E (IgG, que se encuentra comúnmente). Los títulos de anticuerpos se miden en busca de anticuerpos clínicamente significativos durante el embarazo para evaluar el riesgo de HDFN.
El combate cruzado
La prueba cruzada es la comprobación final de la compatibilidad entre los glóbulos rojos del donante y el receptor previsto. Existen tres métodos. La prueba cruzada de espín inmediata detecta la incompatibilidad ABO mezclando plasma del receptor con glóbulos rojos del donante a temperatura ambiente y comprobando la aglutinación. La prueba cruzada de antiglobulina (prueba cruzada de AHG) es la más sensible: incuba el plasma del receptor con glóbulos rojos del donante a 37 °C, seguido de AHG, y detecta anticuerpos contra todos los antígenos clínicamente significativos. La prueba cruzada (electrónica) por computadora se utiliza cuando el paciente tiene una prueba de anticuerpos negativa y no tiene antecedentes de anticuerpos clínicamente significativos, basándose en la verificación por computadora de la compatibilidad ABO entre la unidad donante y el tipo de receptor.
Anticuerpos clínicamente significativos
Los anticuerpos se clasifican como clínicamente significativos si pueden causar reacciones transfusionales hemolíticas, HDFN o reducción de la supervivencia de los glóbulos rojos. Los más importantes son los que actúan contra ABO (IgM, hemólisis intravascular), Rh (D, C, c, E, e — IgG, hemólisis extravascular), Kell (K, k — IgG, fuertemente inmunogénica), Duffy (Fyᵃ, Fyᵇ — IgG, asociada a reacciones retardadas), Kidd (Jkᵃ, Jkᵇ — IgG, implicada en reacciones hemolíticas retardadas, propensas a caer a niveles indetectables niveles), y MNS (S, s — IgG). Los anticuerpos clínicamente insignificantes (generalmente IgM, reactivos al frío, no reactivos a 37°C) incluyen anti-Leᵃ, anti-Leᵇ, anti-I, anti-P1 y la mayoría de los anti-M. La distinción requiere pruebas de amplitud térmica y tipificación de antígenos.
Consideraciones especiales
Los pacientes con una prueba de anticuerpos positiva requieren unidades de eritrocitos con antígeno negativo para la transfusión. El banco de sangre debe mantener un inventario de unidades de donantes fenotipadas para pacientes aloinmunizados. Los pacientes con anemia hemolítica autoinmune cálida (AIHA) plantean desafíos especiales ya que el autoanticuerpo causa panreactividad en el IAT y la prueba cruzada. Las técnicas para resolver la interferencia de autoanticuerpos incluyen pruebas de autocontrol, adsorción en frío y aladsorción para detectar aloanticuerpos subyacentes. Los pacientes con antecedentes de transfusión reciente o embarazo dentro de los tres meses pueden tener una prueba de anticuerpos negativa, pero siguen en riesgo de reacciones hemolíticas tardías debido a niveles bajos de aloanticuerpos por debajo del umbral de detección.
Control de Calidad y Documentación
Todos los procedimientos de detección y pruebas cruzadas de anticuerpos requieren un control de calidad diario: verificación de la integridad de los reactivos (AHG, células de detección, medios de mejora), controles positivos y negativos y documentación de todos los resultados. Se debe verificar el historial del paciente para detectar anticuerpos previos. Una investigación de la reacción a la transfusión requiere detección de anticuerpos post-transfusión, prueba directa de antiglobulina y repetición de la prueba cruzada con la unidad transfundida.
