La migración celular es esencial para el desarrollo embrionario, la cicatrización de heridas y las respuestas inmunes. La invasión extiende la migración con la degradación activa de la matriz extracelular (MEC). Estos ensayos son críticos en la investigación del cáncer, estudios de angiogénesis y cribado de fármacos.

Ensayo de Raspado (Cicatrización de Heridas)

El ensayo de raspado es el método de migración más simple y rentable. Una monocapa confluente se raspa con una punta de pipeta para crear una zona libre de células, y se mide la velocidad a la que las células migran hacia el espacio.

Protocolo:

1. Cultive células hasta 100% de confluencia en una placa de 12 o 24 pocillos.
2. Privación de suero durante la noche para suprimir la proliferación.
3. Raspe la monocapa con una punta de pipeta de 200 µL o una herramienta especializada.
4. Lave con PBS para eliminar las células desprendidas.
5. Añada medio con 0.5–2% de suero (para minimizar la proliferación).
6. Capture imágenes del raspado a intervalos (0, 6, 12, 24 horas) usando un microscopio de contraste de fases.
7. Mida el área de la herida usando ImageJ o una herramienta de análisis automatizada.

Los datos se expresan como % de cierre de la herida o tasa de cierre. El ensayo es simple pero limitado por la variabilidad de los raspados manuales y el efecto confounding de la proliferación en el borde de la herida.

Ensayo Transwell (Cámara de Boyden)

El ensayo Transwell utiliza un sistema de dos cámaras separadas por una membrana porosa (típicamente poros de 8 µm para la mayoría de tipos celulares, 3 µm para células pequeñas como linfocitos). Las células se colocan en la cámara superior, y un quimioatrayente (ej., FBS al 10%, quimiocina específica) se coloca en la cámara inferior. Las células que migran a través de los poros se fijan, tiñen (violeta de cristal, DAPI) y cuentan.

Para ensayos de invasión, la cara superior de la membrana se recubre con una capa fina de Matrigel, un extracto de membrana basal. Las células deben degradar la barrera de MEC antes de migrar a través de los poros, imitando la invasión fisiológica más estrechamente que solo la migración.

Opciones de cuantificación:

• Conteo manual de células teñidas en la parte inferior de la membrana (5–10 campos por pocillo).
• Solubilización del colorante y medición de absorbancia (DO 560–590 nm).
• Preamarque de células con Calceína AM y medición de fluorescencia de células migradas.

Análisis Celular en Tiempo Real

Instrumentos sin marcaje como el xCELLigence utilizan microelectrodos en el fondo de una placa especializada para medir la impedancia eléctrica. A medida que las células migran del pocillo superior a través de una membrana, se adhieren a la superficie del microelectrodo en el lado inferior, aumentando la señal de impedancia. Esto proporciona datos continuos de migración en tiempo real sin tinción ni fijación del punto final.

Consideraciones Clave

• Gradiente de suero: un gradiente de concentración a través de la membrana proporciona migración direccional. Sin gradiente, se mide movimiento aleatorio (quimiocinético).
• Recubrimiento de matriz: para invasión, el tamaño de poro de la membrana, la composición de la matriz (Matrigel, colágeno I, fibronectina) y el grosor del recubrimiento afectan los resultados.
• Densidad celular: muy pocas células dan recuentos pobres; demasiadas causan agregación y poros obstruidos. Optimice la densidad para cada tipo celular.
• Curso temporal: la migración a través de poros de 8 µm típicamente toma 6–24 horas dependiendo del tipo celular.