Cultivo de Hongos

Los hongos (levaduras y mohos) son causas importantes de enfermedades humanas, deterioro de alimentos y contaminación ambiental. Su cultivo requiere medios específicos y condiciones de incubación.

Agar dextrosa Sabouraud (SDA) es el medio estándar para el aislamiento de hongos. Tiene un pH bajo (5.6) que inhibe el crecimiento bacteriano. A menudo se añade cloranfenicol o gentamicina para suprimir la contaminación bacteriana residual. El agar inhibidor de mohos (IMA) es una alternativa para muestras clínicas.

La incubación es a 25–30 °C para hongos ambientales y 35–37 °C para hongos patógenos. Las placas se mantienen hasta 4 semanas antes de reportar como negativas (los mohos crecen lentamente). Las levaduras típicamente crecen en 24–48 horas.

La identificación se basa en:

• Morfología de colonia: textura (polvorienta, algodonosa, aterciopelada), pigmento, tasa de crecimiento, color reverso.
• Morfología microscópica: tipo de hifa (septada vs. no septada), estructura del conidióforo, forma y disposición de esporas. La preparación con azul de lactofenol (LPCB) es la preparación estándar para visualizar estructuras fúngicas de una colonia.
• Pruebas bioquímicas para levaduras: asimilación de fuentes de carbono (API 20C AUX, VITEK YST), prueba de tubo germinal (Candida albicans es positiva).

Cultivo de levaduras: la mayoría de las levaduras crecen en medios bacteriológicos estándar (agar sangre, agar chocolate) así como en SDA. La prueba de tubo germinal para C. albicans implica incubar una colonia en suero a 37 °C durante 2–4 horas y verificar el crecimiento de hifas bajo el microscopio.

Cultivo Anaeróbico

Las bacterias anaeróbicas (Clostridium, Bacteroides, Fusobacterium, Peptostreptococcus) son muertas o inhibidas por el oxígeno. Su cultivo requiere condiciones libres de oxígeno durante todo el manejo e incubación.

Recolección de muestra: obtenga la muestra anaeróbicamente (aspiración con jeringa, hisopo en medio de transporte anaeróbico). Evite exponer la muestra al aire. Transporte al laboratorio dentro de 30 minutos.

Medios anaeróbicos:

• Medios pre-reducidos esterilizados anaeróbicamente (PRAS): hervidos y almacenados en gas libre de oxígeno (N₂, CO₂, H₂).
• Agar sangre Brucella con hemina y vitamina K.
• Agar alcohol feniletílico: suprime anaerobios facultativos.
• Agar sangre lisada con kanamicina-vancomicina: selectivo para Bacteroides y otros anaerobios Gram-negativos.

Incubación anaeróbica:

• Jarra anaeróbica: un contenedor sellado con un sobre generador de gas que produce H₂ y CO₂. Las perlas de catalizador de paladio catalizan la reacción del H₂ con el O₂ residual para formar agua. Una tira indicadora (resazurina) se vuelve incolora cuando se alcanzan condiciones anaeróbicas.
• Cámara anaeróbica: una caja de guantes sellada con una atmósfera de 85% N₂, 10% H₂, 5% CO₂. El catalizador de paladio elimina el oxígeno traza. Permite manipulación continua sin exponer los cultivos al aire.
• Sistema GasPak: un sistema de sobre desechable autocontenido para pequeños números de placas.

La incubación es a 37 °C durante al menos 48 horas. Los anaerobios típicamente crecen más lentamente que los aerobios.