El frotis de sangre periférica (PBS) es una técnica de laboratorio fundamental que proporciona confirmación visual de los resultados automatizados CBC y permite la detección de anomalías morfológicas que los analizadores no pueden identificar de manera confiable. Todo científico de laboratorio médico debe dominar la preparación, la tinción y el examen sistemático del frotis de sangre.

Preparación de un frotis de calidad

Se prepara un frotis en cuña colocando una pequeña gota de sangre anticoagulada con EDTA (o sangre capilar) cerca de un extremo de un portaobjetos de vidrio limpio. Se sostiene un segundo portaobjetos esparcidor en un ángulo de 30 a 45°, se retrocede hacia la gota hasta que la sangre se esparce a lo largo de su borde y luego se empuja suavemente hacia adelante para crear un borde emplumado. El frotis ideal tiene una transición gradual de grueso a fino, con el borde emplumado ocupando entre 1 y 2 cm de la longitud del portaobjetos. El frotis debe secarse al aire rápidamente agitando el portaobjetos. Los artefactos comunes incluyen agujeros (sangre grasa, secado lento), espesor irregular (presión desigual del esparcidor) y cola larga (ángulo del esparcidor demasiado bajo). Luego el frotis se fija en metanol absoluto durante 30 segundos antes de teñirlo.

Tinción de Wright-Giemsa

Las tinciones tipo Romanowsky (Wright, Giemsa o combinación Wright-Giemsa) son el estándar para la tinción de frotis de sangre. Estas tinciones contienen azul B (básico, tiñe los ácidos nucleicos de color azul violeta) y eosina Y (ácido, tiñe la hemoglobina y los gránulos eosinófilos de color rojo anaranjado). El protocolo de tinción implica inundar el frotis fijado con tinción de Wright durante 1 a 2 minutos, luego agregar una solución tampón durante 2 a 4 minutos para promover la tinción diferencial y luego enjuagar con agua. Los frotis teñidos adecuadamente muestran glóbulos rojos rosados, núcleos y ARN de color azul violeta y colores distintos de los gránulos. La tinción excesiva produce colores oscuros y turbios; la tinción insuficiente produce células pálidas y poco diferenciadas.

Examen sistemático de frotis

El examen comienza con un aumento bajo (objetivo de 10×) para evaluar la calidad general, seleccionar el área de recuento óptima e identificar anomalías en la distribución de los leucocitos (efecto de borde en la linfocitosis o CLL), grupos de plaquetas en el borde emplumado y rouleaux o aglutinación de los glóbulos rojos. La evaluación diferencial y morfológica de los glóbulos blancos se realiza con una inmersión en aceite de 50× o 100× en la zona de recuento, el área donde los glóbulos rojos se superponen ligeramente sin apilarse. Se cuentan y clasifican al menos 100 glóbulos blancos para el diferencial manual. El examen cubre tres aspectos en secuencia: estimación y morfología de plaquetas, morfología de glóbulos rojos (tamaño, forma, color, inclusiones) y morfología y diferencial de glóbulos blancos.

Evaluación de la morfología de los glóbulos rojos

Las anomalías en la forma de los glóbulos rojos (poiquilocitos) proporcionan pistas de diagnóstico. Los esferocitos (pequeños, densos, sin palidez central) sugieren esferocitosis hereditaria o AIHA. Los esquistocitos (células fragmentadas) indican anemia hemolítica microangiopática (TTP, HUS, DIC). Las células falciformes confirman la enfermedad de células falciformes. Las células diana se observan en la talasemia, la enfermedad hepática y la enfermedad de HbC. Los eliptocitos sugieren eliptocitosis hereditaria. Las células en forma de lágrima (dacrocitos) con eritrocitos nucleados sugieren mielofibrosis o infiltración de la médula. Los acantocitos (células estimuladoras) aparecen en la enfermedad hepática y en la abetalipoproteinemia. Los equinocitos (células rebabas) suelen ser artefactos, pero pueden indicar uremia. Las inclusiones de eritrocitos incluyen punteado basófilo (intoxicación por plomo, talasemia), cuerpos de Howell-Jolly (posesplenectomía, anemia megaloblástica), cuerpos de Pappenheimer (anemia sideroblástica, talasemia) y anillos de Cabot (anemia megaloblástica, mielodisplasia).

Evaluación de la morfología de los leucocitos

Más allá del recuento diferencial, se observan las características morfológicas de los leucocitos. La granulación tóxica (gránulos de neutrófilos oscuros y gruesos), los cuerpos de Döhle (inclusiones citoplasmáticas de color azul pálido) y la vacuolación indican infección o inflamación. Los neutrófilos hipersegmentados (> 5 lóbulos) sugieren anemia megaloblástica. La anomalía de Pelger-Huët (núcleos bilobulados y quevedos) es una afección hereditaria benigna, pero puede adquirirse en la mielodisplasia. Los blastos se identifican por una proporción nuclear-citoplasmática alta, cromatina abierta, nucléolos prominentes y citoplasma basófilo, y su presencia desencadena una investigación adicional mediante citometría de flujo. Los linfocitos atípicos (citoplasma basófilo grande y abundante, núcleo dentado) son característicos de la infección por EBV.

Estimación y morfología de plaquetas

El recuento de plaquetas se estima a partir del frotis contando las plaquetas en 10 campos de inmersión en aceite y multiplicándolas por 15 a 20 × 10⁹/L. Esto proporciona una verificación rápida del conteo automatizado. Se observan plaquetas gigantes, plaquetas grises (sin gránulos) o cúmulos de plaquetas. La presencia de megatrombocitos sugiere un aumento del recambio plaquetario como se observa en PTI.

Informes y correlación

El informe PBS debe describir la calidad del frotis, los recuentos celulares estimados y todas las anomalías morfológicas utilizando terminología estandarizada. Los hallazgos se correlacionan con los [parámetros de CBC] automatizados (/guides/introduction-to-the-complete-blood-count.html) y la información clínica. El PBS a menudo impulsa pruebas adicionales como electroforesis de hemoglobina, ensayos enzimáticos de glóbulos rojos, citometría de flujo o análisis citogenético.