定量PCR（qPCR），也称为实时PCR，是一种实时扩增和定量DNA的实验室技术。与仅显示最终DNA量的常规PCR不同，qPCR使用荧光监测整个反应过程中DNA的积累。

qPCR的工作原理

1. 反应设置

反应含有与常规PCR相同的组分——模板DNA、引物、DNA聚合酶和核苷酸——外加一种荧光报告分子。两种常见的报告系统是SYBR Green（一种结合双链DNA时发出荧光的染料）和TaqMan探针（序列特异性荧光探针）。

2. 扩增与检测

反应进行与标准PCR相同的热循环：变性、退火和延伸。每个循环后进行一次荧光测量。随着更多DNA被扩增，荧光信号成比例增加。

3. Ct值

阈值循环（Ct）是荧光信号超过背景水平的循环数。Ct值与起始目标DNA量成反比：起始DNA越多，达到阈值所需的循环越少。

4. 定量

绝对定量使用已知DNA浓度的标准曲线来计算目标DNA的准确量。相对定量将目标基因的Ct值与参考基因进行比较，确定表达的倍变变化。

5. 熔解曲线分析

使用SYBR Green时，在扩增后进行熔解曲线分析。缓慢加热DNA同时监测荧光。每个DNA产物在特征温度下熔解，确认产生了正确的扩增子且不存在引物二聚体。