Genaues Flüssigkeitshandhaben ist die häufigste manuelle Operation in jedem Labor. Fehler in dieser Phase pflanzen sich durch jeden nachfolgenden Schritt fort, weshalb Pipettiertechnik und Lösungsherstellung für die Reproduzierbarkeit entscheidend sind.

Pipettierprinzipien

Luftpolsterpipetten funktionieren, indem sie ein Luftpolster zwischen dem Kolben und der Flüssigkeit erzeugen. Das Volumen wird mechanisch oder digital eingestellt, und der Kolben verdrängt ein entsprechendes Luftvolumen, um Flüssigkeit aufzunehmen oder abzugeben.

Halten Sie die Pipette beim Aufziehen für genaues Pipettieren vertikal. Tauchen Sie die Spitze 2–4 mm unter den Meniskus für Mikrolitervolumina, tiefer für größere Volumina. Drücken Sie den Kolben bis zum ersten Widerstand, ziehen Sie die Flüssigkeit langsam und gleichmäßig auf, ziehen Sie dann die Spitze an der Behälterwand entlang. Geben Sie ab, indem Sie bis zum ersten Widerstand drücken, pausieren, dann bis zum zweiten Widerstand drücken, um restliche Flüssigkeit auszublasen.

Häufige Pipettierfehler

• Vorbefeuchten: Aufziehen und Abgeben der Flüssigkeit 2-3 Mal vor dem eigentlichen Transfer befeuchtet das Luftpolster und reduziert Verdunstungsverluste.
• Temperatureffekte: Das Luftpolster dehnt sich mit der Temperatur aus oder zieht sich zusammen. Pipette und Flüssigkeit sollten Raumtemperatur haben.
• Viskose Flüssigkeiten: Rückwärtspipettieren (bis zum zweiten Widerstand für Aufnahme drücken, bis zum ersten Widerstand abgeben) verbessert die Genauigkeit für viskose oder schäumende Lösungen.
• Spitzenauswahl: Verwenden Sie die richtige Spitze für die Pipettenmarke. Low-Retention-Spitzen reduzieren Probenverluste bei Proteinen und Detergenzien.

Herstellung von Lösungen

Masse-/Volumenprozent-Lösungen werden hergestellt, indem eine abgewogene Masse des gelösten Stoffes im Lösungsmittel gelöst und auf das Endvolumen gebracht wird. Molare Lösungen werden hergestellt, indem die Stoffmenge aus dem Molekulargewicht berechnet, gelöst und in einem Messkolben auf das Volumen eingestellt wird.

Geben Sie den gelösten Stoff immer zu einem Teilvolumen des Lösungsmittels, schwenken Sie zum Lösen und füllen Sie dann bis zur Endmarkierung auf. Geben Sie niemals Lösungsmittel zu trockenem gelösten Stoff in einen Messkolben — das Volumen könnte überschritten werden.

Serielle Verdünnungen und Stamlösungen

Eine Stammlösung ist eine konzentrierte Lösung, die auf Arbeitskonzentration verdünnt wird. Der Verdünnungsfaktor ist das Verhältnis von Endvolumen zu Aliquotvolumen:

C₁V₁ = C₂V₂

Serielle Verdünnungen sind eine schrittweise Verdünnungsreihe, bei der jeder Schritt um einen konstanten Faktor (typischerweise 10-fach oder 2-fach) verdünnt. Dies ist der effizienteste Weg, um einen logarithmischen Konzentrationsbereich für Standardkurven, MHK-Tests oder Zytotoxizitätstests zu erzeugen.

Mischen Sie bei der Herstellung einer Verdünnungsreihe bei jedem Schritt gründlich und wechseln Sie die Pipettenspitze zwischen den Transfers, um Verschleppungen zu vermeiden.