O manuseio preciso de líquidos é a operação manual mais frequente em qualquer laboratório. Erros nesta etapa propagam-se por todas as etapas subsequentes, tornando a técnica de pipetagem e a preparação de soluções críticas para a reprodutibilidade.

Princípios de Pipetagem

As pipetas de deslocamento de ar funcionam criando uma almofada de ar entre o pistão e o líquido. O volume é ajustado mecânica ou digitalmente, e o pistão desloca um volume correspondente de ar para aspirar ou dispensar líquido.

Para pipetagem precisa, segure a pipeta verticalmente durante a aspiração. Imirja a ponta 2–4 mm abaixo do menisco para volumes microlitros, mais fundo para volumes maiores. Pressione o êmbolo até o primeiro estágio, aspire o líquido lenta e suavemente, depois retire a ponta ao longo da parede do recipiente. Dispense pressionando até o primeiro estágio, pause, depois pressione até o segundo estágio para expelir qualquer líquido remanescente.

Erros Comuns de Pipetagem

• Pré-umidificação: aspirar e dispensar o líquido 2–3 vezes antes da transferência real umidifica a almofada de ar e reduz a perda por evaporação.
• Efeitos de temperatura: a almofada de ar expande ou contrai com a temperatura. Tanto a pipeta quanto o líquido devem estar à temperatura ambiente.
• Líquidos viscosos: a pipetagem reversa (pressionar até o segundo estágio para aspiração, dispensar até o primeiro estágio) melhora a precisão para soluções viscosas ou espumantes.
• Seleção de pontas: use a ponta correta para a marca da pipeta. Pontas de baixa retenção reduzem a perda de amostra para proteínas e detergentes.

Preparando Soluções

Soluções percentuais massa/volume são preparadas dissolvendo uma massa pesada de soluto em solvente e completando até o volume final. Soluções molares são preparadas calculando os moles a partir do peso molecular, dissolvendo e ajustando ao volume em um balão volumétrico.

Sempre adicione o soluto a um volume parcial de solvente, agite para dissolver, depois complete até a marca final. Nunca adicione solvente a soluto seco em um balão volumétrico — o volume pode ultrapassar a marca.

Diluições Seriadas e de Estoque

Uma solução estoque é uma solução concentrada que é diluída até a concentração de trabalho. O fator de diluição é a razão entre o volume final e o volume da alíquota:

C₁V₁ = C₂V₂

Diluições seriadas são uma série de diluições em etapas onde cada etapa dilui por um fator constante (tipicamente 10 vezes ou 2 vezes). Esta é a maneira mais eficiente de produzir uma faixa logarítmica de concentrações para curvas padrão, ensaios de CIM ou testes de citotoxicidade.

Ao preparar uma série de diluições, misture bem em cada etapa e troque a ponta da pipeta entre as transferências para evitar arraste.