Die Gram-Färbung unterscheidet Bakterien anhand der Zellwandstruktur, aber viele bakterielle Merkmale erfordern spezielle Färbemethoden für die mikroskopische Visualisierung.

Endosporenfärbung (Schaeffer-Fulton)

Bakterielle Endosporen (Bacillus, Clostridium) sind ruhende, hochresistente Strukturen, die sich mit einfachen oder Gram-Färbungen nicht anfärben lassen. Die Schaeffer-Fulton-Methode verwendet Malachitgrün, das durch Hitze (Dämpfen) in die Spore getrieben wird, und Safranin als Gegenfärbung.

1. Fluten Sie den Ausstrich mit 5 % (w/v) Malachitgrün und dämpfen Sie 5 Minuten (halten Sie den Objektträger feucht, indem Sie mehr Farbe hinzufügen).
2. Abkühlen lassen und mit Wasser abspülen (Malachitgrün bleibt in der Spore eingeschlossen, wird aber aus vegetativen Zellen ausgewaschen).
3. Gegenfärbung mit 0,5 % Safranin für 30 Sekunden.
4. Spülen, trockentupfen und untersuchen.

Sporen erscheinen grün (oft als ovale oder kugelförmige Körper innerhalb oder freigesetzt aus den pink/roten vegetativen Zellen). Die Position der Spore (terminal, subterminal, zentral) ist ein wichtiges Identifikationsmerkmal.

Kapselfärbung

Kapseln sind Polysaccharid- oder Polypeptidschichten, die einige Bakterien umgeben und sie vor Phagozytose und Austrocknung schützen. Kapseln sind wasserlöslich und werden durch Hitzefixierung leicht zerstört.

Anthonys Methode: der Ausstrich wird luftgetrocknet (nicht hitzefixiert!), mit 1% Kristallviolett für 2 Minuten gefärbt und dann mit 20% Kupfersulfat gewaschen. Das Kupfersulfat wirkt als Entfärber und Beize. Die Kapsel erscheint als hellvioletter Hof um eine dunkelviolette Zelle vor hellem Hintergrund.

India Ink-Negativfärbung: mischen Sie die Bakteriensuspension mit India Ink, verteilen Sie dünn und lufttrocknen Sie. Die Tuschepartikel können nicht in die Kapsel eindringen und hinterlassen einen klaren Hof um die Zelle vor dunklem Hintergrund. Eosin oder Nigrosin können anstelle von India Ink verwendet werden.

Geißelfärbung

Bakterielle Geißeln sind 10–20 nm dick — unterhalb der Auflösung der Lichtmikroskopie. Geißelfärbungen verwenden eine Beize (Gerbsäure) zum Beschichten und Verdicken der Geißeln, gefolgt von einer Silberfärbung oder Pararosanilin-Farbstoff.

1. Verwenden Sie eine junge Kultur (Log-Phase), die auf festem Medium gezüchtet wurde.
2. Bereiten Sie einen dünnen, luftgetrockneten Ausstrich — nicht hitzefixieren.
3. Tragen Sie die Beize auf (z. B. Leifson-Färbung: Gerbsäure, basisches Fuchsin, Natriumchlorid) und inkubieren Sie.
4. Die Geißeln erscheinen als dünne, wellige Fäden, die vom Zellkörper ausgehen.

Die Geißelanordnung (polar, peritrich, lophotrich) ist ein wichtiges taxonomisches Merkmal.

Säurefeste Färbung (Ziehl-Neelsen)

Mycobacterium-Arten (Tuberkulose, Lepra) haben eine wachsartige, mykolsäurereiche Zellwand, die der Standard-Gram-Färbung widersteht. Die Ziehl-Neelsen-Methode verwendet Hitze, um Carbolfuchsin durch die wachsartige Barriere zu treiben:

1. Fluten Sie den Ausstrich mit Carbolfuchsin und dämpfen Sie 5 Minuten.
2. Entfärben Sie mit 3% HCl in 95% Ethanol (Säure-Alkohol) — nicht säurefeste Bakterien verlieren den Farbstoff.
3. Gegenfärbung mit Methylenblau für 1 Minute.

Säurefeste Bakterien erscheinen leuchtend rot vor blauem Hintergrund. Die Kinyoun-Methode verwendet eine höhere Phenolkonzentration und ein Detergens im Carbolfuchsin, was die Notwendigkeit des Erhitzens überflüssig macht. Die Auramin-Rhodamin-Färbung verwendet fluoreszierende Farbstoffe für eine höhere Empfindlichkeit beim Tuberkulose-Screening.