Pilzkultur

Pilze (Hefen und Schimmelpilze) sind wichtige Ursachen menschlicher Krankheiten, Lebensmittelverderb und Umweltkontamination. Ihre Kultur erfordert spezifische Medien und Inkubationsbedingungen.

Sabouraud-Dextrose-Agar (SDA) ist das Standardmedium für die Pilzisolierung. Er hat einen niedrigen pH-Wert (5,6), der das Bakterienwachstum hemmt. Chloramphenicol oder Gentamicin wird oft zugesetzt, um restliche bakterielle Kontamination zu unterdrücken. Inhibitory Mold Agar (IMA) ist eine Alternative für klinische Proben.

Die Inkubation erfolgt bei 25–30 °C für Umweltpilze und 35–37 °C für pathogene Pilze. Platten werden bis zu 4 Wochen bebrütet, bevor sie als negativ gemeldet werden (Schimmelpilze wachsen langsam). Hefen wachsen typischerweise innerhalb von 24–48 Stunden.

Identifizierung basiert auf:

• Koloniemorphologie: Textur (pudrig, baumwollartig, samtig), Pigment, Wachstumsrate, Rückseitenfarbe.
• Mikroskopischer Morphologie: Hyphentyp (septiert vs. nicht septiert), Konidiophorstruktur, Sporenform und -anordnung. Der Lactophenol-Baumwollblau (LPCB)-Mount ist die Standardpräparation zur Visualisierung von Pilzstrukturen aus einer Kolonie.
• Biochemischen Tests für Hefen: Assimilation von Kohlenstoffquellen (API 20C AUX, VITEK YST), Keimschlauchtest (Candida albicans ist positiv).

Hefekultur: die meisten Hefen wachsen auf Standard-Bakterienmedien (Blutagar, Chocolate-Agar) sowie auf SDA. Der Keimschlauchtest für C. albicans beinhaltet die Inkubation einer Kolonie in Serum bei 37 °C für 2–4 Stunden und die Überprüfung auf Hyphenauswuchs unter dem Mikroskop.

Anaerobe Kultur

Anaerobe Bakterien (Clostridium, Bacteroides, Fusobacterium, Peptostreptococcus) werden durch Sauerstoff abgetötet oder gehemmt. Ihre Kultur erfordert sauerstofffreie Bedingungen während der gesamten Handhabung und Inkubation.

Probenentnahme: entnehmen Sie die Probe anaerob (Spritzenaspiration, Tupfer in anaerobem Transportmedium). Vermeiden Sie die Exposition der Probe gegenüber Luft. Transportieren Sie das Material innerhalb von 30 Minuten ins Labor.

Anaerobe Medien:

• Prä reduzierte anaerob sterilisierte (PRAS) Medien: gekocht und in sauerstofffreiem Gas (N₂, CO₂, H₂) gelagert.
• Brucella-Blutagar mit Hämin und Vitamin K.
• Phenylethylalkohol-Agar: unterdrückt fakultative Anaerobier.
• Kanamycin-Vancomycin-Lack-Blutagar: selektiv für Bacteroides und andere Gram-negative Anaerobier.

Anaerobe Inkubation:

• Anaerobiertopf: ein verschlossener Behälter mit einem Gas erzeugenden Umschlag, der H₂ und CO₂ produziert. Palladiumkatalysator-Kügelchen katalysieren die Reaktion von H₂ mit restlichem O₂ zu Wasser. Ein Indikatorstreifen (Resazurin) wird farblos, wenn anaerobe Bedingungen erreicht sind.
• Anaerobe Kammer: eine versiegelte Handschuhbox mit einer Atmosphäre von 85 % N₂, 10 % H₂, 5 % CO₂. Der Palladiumkatalysator entfernt Spuren von Sauerstoff. Ermöglicht kontinuierliche Manipulation ohne Exposition der Kulturen gegenüber Luft.
• GasPak-System: ein in sich geschlossenes Einweg-Umschlagsystem für kleine Plattenzahlen.

Die Inkubation erfolgt bei 37 °C für mindestens 48 Stunden. Anaerobier wachsen typischerweise langsamer als Aerobier.