Los depósitos de amiloide, pigmentos y minerales se acumulan en los tejidos en una amplia gama de enfermedades. Su identificación histoquímica proporciona diagnósticos específicos que muchas veces no pueden realizarse mediante ninguna otra técnica.
Rojo Congo para amiloide
El rojo Congo es la tinción histoquímica estándar para amiloide. En solución alcalina, el rojo Congo se une a la estructura laminar beta-plisada de las fibrillas de amiloide mediante la intercalación entre hebras beta adyacentes. Bajo microscopía de campo claro, los depósitos de amiloide se tiñen de color rosa salmón a rojo. El hallazgo diagnóstico es birrefringencia verde manzana bajo polarizadores cruzados, el resultado de las moléculas de rojo Congo alineadas a lo largo de las fibrillas de amiloide, que a su vez están dispuestas en una matriz birrefringente altamente ordenada.
Los tipos de amiloide (AL, AA, ATTR, Aβ, etc.) no se pueden distinguir solo con el rojo Congo: IHC para subtipos de amiloide (cadenas ligeras kappa y lambda, amiloide A sérico, transtiretina, beta-amiloide) o se requiere espectrometría de masas para tipificar. La sensibilidad del Rojo Congo es alta para depósitos grandes, pero puede pasar por alto depósitos tempranos o pequeños; examine varias secciones bajo polarización. La unión del rojo Congo falso positivo puede ocurrir en fibras elásticas, colágeno e hialinas; solo la birrefringencia verde manzana confirma el amiloide.
Tioflavina T
La tioflavina T es un tinte fluorescente que se une al amiloide y muestra una fluorescencia mejorada con un cambio de emisión característico. Es más sensible que el rojo Congo para detectar pequeños depósitos de amiloide, pero requiere un microscopio de fluorescencia y es menos específico. Congo Red sigue siendo el estándar de oro para el diagnóstico de amiloide.
Azul de Prusia de Perls para el hierro
El azul de Prusia de Perls detecta hierro férrico (Fe3+) en secciones de tejido. Las secciones se tratan con ácido clorhídrico y ferrocianuro de potasio; Los iones férricos reaccionan con el ferrocianuro para formar azul de Prusia insoluble (ferrocianuro férrico). La reacción produce un precipitado azul en el lugar del hierro. El fondo suele estar teñido con rojo nuclear rápido.
La tinción de Perls identifica hemosiderina (ferritina agregada) en condiciones de sobrecarga de hierro: hemocromatosis hereditaria (hierro de hepatocitos), siderosis relacionada con transfusiones, enfermedad hepática alcohólica y anemias hemolíticas. En la médula ósea, Perls clasifica el hierro teñible (escala 0-6). En el pulmón, Perls demuestra células de insuficiencia cardíaca (macrófagos cargados de hemosiderina) en la congestión pulmonar y confirma la hemosiderosis pulmonar. En el bazo y los ganglios linfáticos se identifican fácilmente los depósitos de hierro después de una hemorragia o un infarto.
Von Kossa para el calcio
La tinción de Von Kossa detecta depósitos de calcio sustituyendo el calcio por iones de plata en sales de calcio insolubles (fosfato, carbonato). Bajo luz ultravioleta o luz brillante, la plata se reduce a plata metálica, pareciendo negra o marrón. El fondo está contrateñido con rojo nuclear rápido o Van Gieson.
Von Kossa se utiliza para demostrar calcificación patológica: calcificación distrófica en tejido necrótico, tumores (cuerpos de psammoma en meningioma, carcinoma papilar de tiroides, carcinoma seroso de ovario), válvulas cardíacas calcificadas y tendinitis calcificada. También identifica calcificación metastásica (deposición de calcio en tejidos normales debido a hipercalcemia) en riñón, pulmón y mucosa gástrica. Von Kossa no detecta oxalato de calcio; para oxalato, use Alizarin Red S a pH 4,0 o luz polarizada (los cristales de oxalato son birrefringentes).
Rojo de alizarina S para calcio
Alizarin Red S forma un precipitado de color rojo anaranjado con iones de calcio a un pH alcalino (4,0-4,5). Es más específico para el calcio que Von Kossa y detecta tanto el fosfato cálcico como el oxalato cálcico. El rojo de alizarina se utiliza para identificar depósitos de calcio en tejidos blandos, calcificación vascular y nefrocalcinosis. También es la tinción estándar para identificar calcio en secciones histológicas de huesos y dientes.
Bilirrubina y tinciones de bilis
La tinción de Fouchet (ácido tricloroacético y cloruro férrico) oxida la bilirrubina a biliverdina, luego verde/azul al color verde esmeralda de la bilis. Se utiliza para identificar colestasis intrahepática y extrahepática en biopsias de hígado y trombos biliares en canalículos. La tinción de Hall (Van Gieson con Fouchet) tiñe simultáneamente la bilis (verde/azul) y el colágeno (rojo). El pigmento biliar debe distinguirse de la lipofuscina (pigmento de la edad) y la hemosiderina: el pigmento de Perls tiñe de azul hierro y el PAS tiñe la lipofuscina de forma variable.
Blanqueador de melanina
La melanina es un pigmento marrón-negro endógeno que puede oscurecer los detalles celulares y la interpretación IHC. El blanqueador de melanina (permanganato de potasio seguido de ácido oxálico) elimina la melanina sin dañar la morfología o la antigenicidad del tejido, lo que permite la evaluación de los detalles celulares debajo de los depósitos pesados de melanina. Las secciones blanqueadas se pueden utilizar para IHC después de la optimización del protocolo.
Control de calidad
Cada tinción especial requiere controles positivos apropiados realizados al mismo tiempo: tejido que contiene amiloide (rojo Congo), hígado sobrecargado de hierro (Perls), arteria calcificada (Von Kossa) e hígado teñido con bilis (Fouchet). El fallo de control invalida la ejecución. Se aplican los procedimientos estándar de solución de problemas; si los controles son débiles, verifique la frescura del reactivo, el pH y los tiempos de incubación.
