Cuando se sospecha de agentes infecciosos en H&E pero no se pueden identificar definitivamente, las tinciones histoquímicas especiales resaltan los microorganismos en las secciones de tejido. Estas tinciones siguen siendo esenciales a pesar del uso cada vez mayor de IHC y diagnóstico molecular: son rápidas, económicas y proporcionan un contexto morfológico.
Tinción de Gram de tejido
La tinción de Gram tisular (modificación Brown-Hopps o Brown-Brenn) diferencia las bacterias Gram positivas (azul-púrpura) de las Gram negativas (rojo-rosa) en secciones de parafina. A diferencia de la técnica de tinción de Gram bacteriana utilizada en microbiología, que utiliza cultivo fresco, la tinción de Gram tisular funciona en tejido procesado y fijado. Tintes violeta cristal Paredes de células grampositivas; safranina o fucsina básica contratiñen bacterias Gram negativas, núcleos y fondo. La tinción de Gram tisular es útil para identificar la morfología bacteriana (cocos, bastones) y el patrón de reacción del tejido: la inflamación supurativa sugiere bacterias piógenas; la inflamación granulomatosa sugiere micobacterias u hongos.
Ziehl-Neelsen para los bacilos ácido-alcohol resistentes
Ziehl-Neelsen (ZN) tiñe las micobacterias (Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, micobacterias no tuberculosas) aprovechando su pared celular cerosa y rica en ácido micólico que retiene el tinte carbolfucsina después de la decoloración con ácido-alcohol. Los bacilos acidorresistentes aparecen de color rojo brillante contra una contratinción de azul de metileno o verde brillante. La sensibilidad a ZN en el tejido es aproximadamente del 40 al 60 % en comparación con el cultivo o la PCR: la ZN negativa no descarta una infección por micobacterias. El ZN modificado (Fite-Faraco) utiliza un decolorante de alcohol ácido más suave para M. leprae y Nocardia, que son menos resistentes al ácido que M. tuberculosis.
Plata y metenamina de Grocott (GMS)
GMS es la tinción más sensible para detectar hongos en tejidos. El ácido crómico oxida los polisacáridos de la pared celular de los hongos a aldehídos; La solución de metenamina y plata reduce los iones de plata a plata metálica en los sitios aldehídos, depositando plata negra en las paredes celulares de los hongos. El fondo está teñido de verde claro.
GMS detecta prácticamente todos los hongos clínicamente relevantes: Candida (levadura y pseudohifas), Aspergillus (hifas septadas que se ramifican a 45°), Mucor (hifas anchas, no septadas que se ramifican a 90°), Cryptococcus (levadura encapsulada, gemación de base estrecha), Histoplasma (levaduras intracelulares pequeñas), Blastomyces (base ancha levaduras en ciernes), Coccidioides (esférulas que contienen endosporas) y Pneumocystis jirovecii (quistes con morfología característica en forma de punto). GMS también tiñe elastina, que puede servir como control positivo interno.
Ácido periódico de Schiff (PAS) para hongos
PAS tiñe las paredes celulares de los hongos de color magenta y es complementario al GMS. Es más específico que GMS (menos falsos positivos de desechos) pero un poco menos sensible. Muchos laboratorios utilizan tanto GMS como PAS en cada caso de hongos para maximizar la detección. El PAS con diastasa elimina el glucógeno que podría confundirse con hongos.
Warthin-Starry para espiroquetas
La impregnación de plata Warthin-Starry tiñe las espiroquetas de negro sobre un fondo amarillo-marrón pálido. La técnica deposita plata metálica sobre los microorganismos mediante una solución de nitrato de plata reducida por hidroquinona. Warthin-Starry se utiliza para detectar Treponema pallidum (sífilis: muestra organismos espirales en la piel, los ganglios linfáticos y la placenta), Borrelia burgdorferi (enfermedad de Lyme), Helicobacter pylori (gastritis) y Bartonella henselae (enfermedad por arañazo de gato, angiomatosis bacilar). El tinte es técnicamente exigente y requiere un control preciso de la temperatura y el pH.
Giemsa para Microorganismos Intracelulares
La tinción de Giemsa se utiliza para Helicobacter pylori en biopsias gástricas (bastones espirales en la superficie de la mucosa), Chlamydia (inclusiones intracitoplasmáticas en muestras conjuntivales, cervicales o respiratorias), Babesia y Plasmodium (parásitos intraeritrocíticos) y Leishmania (amastigotes en macrófagos). Giemsa tiñe los núcleos de color azul púrpura y el citoplasma de rosa; Los microorganismos aparecen como estructuras basófilas distintas.
Comparación y algoritmo
Un algoritmo de tinción de diagnóstico para sospecha de infección comienza con Gram y GMS para todos los casos. Si se observan bacilos Gram positivos, agregue ZN para Nocardia y micobacterias. Si hay inflamación granulomatosa sin organismos visibles, agregue ZN y GMS. Si se sospecha de espiroquetas, agregue Warthin-Starry. Si hay inclusiones virales, la IHC para virus específicos (CMV, EBV, HSV, HHV8, adenovirus) proporciona una identificación definitiva. Todas las tinciones especiales requieren controles positivos realizados simultáneamente y los resultados deben correlacionarse con cultivos, serología y pruebas moleculares para un diagnóstico definitivo.
