A triagem de anticorpos (teste indireto de antiglobulina, IAT) e a prova cruzada são procedimentos essenciais de compatibilidade pré-transfusional. Esses testes detectam anticorpos clinicamente significativos no plasma do paciente que podem causar reações transfusionais hemolíticas ou doença hemolítica do feto e do recém-nascido.
O teste indireto de antiglobulina (IAT)
O IAT detecta anticorpos RBC inesperados no plasma do paciente. O plasma do paciente é incubado com reagentes de triagem de hemácias de fenótipos de antígenos conhecidos (normalmente dois ou três conjuntos de células cobrindo antígenos clinicamente significativos, incluindo D, C, c, E, e, K, k, Fyᵃ, Fyᵇ, Jkᵃ, Jkᵇ, Leᵃ, Leᵇ, M, N, S, s, P1). Após incubação a 37°C para permitir a ligação do anticorpo, as células são lavadas para remover as imunoglobulinas não ligadas. É adicionada globulina anti-humana (AHG, reagente de Coombs), que une os anticorpos IgG ligados às células, causando aglutinação se os anticorpos estiverem presentes. O IAT pode ser realizado em tubo, coluna de gel (microcoluna) ou métodos de fase sólida, com gel e fase sólida oferecendo melhor padronização e sensibilidade.
Identificação de Anticorpos
Quando a triagem de anticorpos é positiva, a identificação é realizada testando o plasma do paciente contra um painel de 11 a 16 hemácias fenotipadas. O padrão de reatividade é analisado para determinar a especificidade do anticorpo. Vários anticorpos podem estar presentes simultaneamente, exigindo exclusão cuidadosa. As características de anticorpos comuns clinicamente significativos incluem: anti-K (IgG, forte resposta anamnéstica), anti-Fyᵃ (IgG, efeito de dosagem), anti-Jkᵃ (IgG, difícil de detectar, associado a reações hemolíticas retardadas), anti-M (frequentemente IgM, reativo ao frio, geralmente clinicamente insignificante a 37°C) e anti-E (IgG, comumente encontrado). Os títulos de anticorpos são medidos para anticorpos clinicamente significativos na gravidez para avaliar o risco de HDFN.
A partida cruzada
A prova cruzada é a verificação final da compatibilidade entre os eritrócitos do doador e o receptor pretendido. Existem três métodos. A prova cruzada de spin imediata detecta a incompatibilidade ABO misturando o plasma receptor com hemácias do doador em temperatura ambiente e verificando se há aglutinação. A prova cruzada de antiglobulina (prova cruzada de AHG) é a mais sensível, incubando o plasma receptor com hemácias do doador a 37°C, seguida pela AHG, detectando anticorpos para todos os antígenos clinicamente significativos. A prova cruzada (eletrônica) por computador é usada quando o paciente tem um teste de anticorpos negativo e nenhum histórico de anticorpos clinicamente significativos, contando com a verificação por computador da compatibilidade ABO entre a unidade doadora e o tipo de receptor.
Anticorpos clinicamente significativos
Os anticorpos são classificados como clinicamente significativos se puderem causar reações transfusionais hemolíticas, HDFN ou redução da sobrevida de hemácias. Os mais significativos são aqueles contra ABO (IgM, hemólise intravascular), Rh (D, C, c, E, e — IgG, hemólise extravascular), Kell (K, k — IgG, fortemente imunogênico), Duffy (Fyᵃ, Fyᵇ — IgG, associado a reações tardias), Kidd (Jkᵃ, Jkᵇ — IgG, implicado em reações hemolíticas tardias, com tendência a cair para níveis indetectáveis), e MNS (S, s — IgG). Anticorpos clinicamente insignificantes (geralmente IgM, reativos ao frio, não reativos a 37°C) incluem anti-Leᵃ, anti-Leᵇ, anti-I, anti-P1 e a maioria dos anti-M. A distinção requer testes de amplitude térmica e tipagem de antígeno.
Considerações Especiais
Pacientes com teste de anticorpos positivo necessitam de unidades de hemácias negativas para antígeno para transfusão. O banco de sangue deve manter um inventário de unidades doadoras fenotipadas para pacientes aloimunizados. Pacientes com anemia hemolítica autoimune quente (AIHA) apresentam desafios especiais, pois o autoanticorpo causa pan-reatividade no IAT e na prova cruzada. As técnicas para resolver a interferência de autoanticorpos incluem testes de autocontrole, adsorção a frio e alloadsorção para detectar aloanticorpos subjacentes. Pacientes com histórico de transfusão recente ou gravidez dentro de 3 meses podem ter uma triagem de anticorpos negativa, mas permanecem em risco de reações hemolíticas tardias devido a níveis baixos de aloanticorpos abaixo do limiar de detecção.
Controle de Qualidade e Documentação
Todos os procedimentos de triagem de anticorpos e de prova cruzada exigem controle de qualidade diário: verificação da integridade dos reagentes (AHG, células de triagem, meios de melhoramento), controles positivos e negativos e documentação de todos os resultados. O histórico do paciente deve ser verificado quanto a anticorpos anteriores. Uma investigação de reação transfusional requer triagem de anticorpos pós-transfusão, teste direto de antiglobulina e repetição de prova cruzada com a unidade transfundida.
