Cultura de Fungos

Os fungos (leveduras e bolores) são causas importantes de doença humana, deterioração de alimentos e contaminação ambiental. A sua cultura requer meios específicos e condições de incubação.

Ágar Sabouraud dextrose (SDA) é o meio padrão para isolamento de fungos. Tem um pH baixo (5,6) que inibe o crescimento bacteriano. Cloranfenicol ou gentamicina são frequentemente adicionados para suprimir a contaminação bacteriana residual. O ágar inibidor de bolores (IMA) é uma alternativa para espécimes clínicos.

A incubação é a 25–30 °C para fungos ambientais e 35–37 °C para fungos patogénicos. As placas são mantidas até 4 semanas antes de reportar como negativas (os bolores crescem lentamente). As leveduras crescem tipicamente dentro de 24–48 horas.

A identificação baseia-se em:

• Morfologia da colónia: textura (pulverulenta, algodoada, aveludada), pigmento, taxa de crescimento, cor reversa.
• Morfologia microscópica: tipo de hifa (septada vs. não septada), estrutura do conidióforo, forma e disposição dos esporos. A montagem em lactofenol azul algodão (LPCB) é a preparação padrão para visualizar estruturas fúngicas a partir de uma colónia.
• Testes bioquímicos para leveduras: assimilação de fontes de carbono (API 20C AUX, VITEK YST), teste de tubo germinativo (Candida albicans é positiva).

Cultura de leveduras: a maioria das leveduras cresce em meios bacteriológicos padrão (ágar sangue, ágar chocolate) assim como em SDA. O teste do tubo germinativo para C. albicans envolve incubar uma colónia em soro a 37 °C por 2–4 horas e verificar o crescimento de hifas ao microscópio.

Cultura Anaeróbica

As bactérias anaeróbicas (Clostridium, Bacteroides, Fusobacterium, Peptostreptococcus) são mortas ou inibidas pelo oxigénio. A sua cultura requer condições isentas de oxigénio durante todo o manuseamento e incubação.

Colheita de espécime: obtenha o espécime anaerobicamente (aspiração com seringa, zaragatoa em meio de transporte anaeróbico). Evite expor a amostra ao ar. Transporte para o laboratório dentro de 30 minutos.

Meios anaeróbicos:

• Meios PRAS (pré-reduzidos esterilizados anaerobicamente): fervidos e armazenados em gás isento de oxigénio (N₂, CO₂, H₂).
• Ágar sangue Brucella com hemina e vitamina K.
• Ágar álcool feniletilo: suprime anaeróbios facultativos.
• Ágar sangue hemolisado com canamicina-vancomicina: seletivo para Bacteroides e outros anaeróbios Gram-negativos.

Incubação anaeróbica:

• Jarra anaeróbica: um recipiente selado com um envelope gerador de gás que produz H₂ e CO₂. Pérolas de catalisador de paládio catalisam a reação do H₂ com O₂ residual para formar água. Uma tira indicadora (resazurina) torna-se incolor quando as condições anaeróbicas são alcançadas.
• Câmara anaeróbica: uma caixa de luvas selada com uma atmosfera de 85% N₂, 10% H₂, 5% CO₂. Catalisador de paládio remove oxigénio residual. Permite manipulação contínua sem expor culturas ao ar.
• Sistema GasPak: um sistema de envelope descartável autónomo para pequenos números de placas.

A incubação é a 37 °C por pelo menos 48 horas. Os anaeróbios crescem tipicamente mais lentamente que os aeróbios.