Visão Geral
A metabolômica por LC-MS combina o poder de separação da cromatografia líquida com a especificidade de detecção da espectrometria de massas para perfilar metabólitos em amostras biológicas complexas. A cromatografia líquida separa os metabólitos com base em suas propriedades físico-químicas — tipicamente hidrofobicidade em fase reversa ou polaridade em cromatografia líquida de interação hidrofílica (HILIC) — antes de entrarem no espectrômetro de massas. Esta separação bidimensional (tempo de retenção mais m/z) permite a detecção de milhares de características de metabólitos em uma única corrida. A metabolômica por LC-MS tornou-se a plataforma dominante para perfil metabólico não direcionado devido à sua ampla cobertura de metabólitos quimicamente diversos.
Métodos
A CLAE em fase reversa separa metabólitos não polares a moderadamente polares usando colunas C18 com gradientes aquoso-orgânicos, sendo ideal para lipídios, aminoácidos e pequenos ácidos orgânicos. A HILIC retém metabólitos polares como açúcares, nucleotídeos e fosfatos orgânicos que são mal retidos em colunas de fase reversa. A espectrometria de massas de alta resolução — usando instrumentos quadrupolo-Orbitrap ou quadrupolo-tempo de voo (QTOF) — fornece medição de massa precisa dentro de 1-5 ppm, permitindo atribuição confiável de fórmula molecular. A aquisição de dados é realizada em modo varredura completa para perfil não direcionado ou em modos direcionados como monitoramento de reação paralela para ensaios quantitativos.
Aplicações
A metabolômica por LC-MS é usada em pesquisa clínica para identificar biomarcadores metabólicos para doenças incluindo câncer, diabetes e distúrbios neurodegenerativos. No desenvolvimento de medicamentos, ela mede a resposta metabolômica à intervenção farmacológica. A metabolômica ambiental aplica LC-MS para avaliar respostas de organismos a poluentes e estressores. A técnica integra princípios de separação por HPLC com detecção por espectrometria de massas e segue técnicas de preparo de amostras que são críticas para preservar a integridade e reprodutibilidade dos metabólitos.
