A eletroforese de proteínas séricas (SPEP ou SPE) separa a mistura complexa de proteínas do soro em frações distintas com base na sua mobilidade eletroforética. É uma ferramenta de rastreio primária para mieloma múltiplo e outras discrasias de plasmócitos.

Princípio

As proteínas séricas têm carga negativa a pH alcalino (pH 8,6) e migram em direção ao ânodo quando um campo elétrico é aplicado. A taxa de migração depende da carga líquida, tamanho e forma da proteína, bem como do meio de suporte (gel de agarose ou acetato de celulose).

Em gel de agarose a pH 8,6, as proteínas séricas separam-se em cinco frações principais (do ânodo ao cátodo):

1. Albumina (o maior pico, ~55–65% da proteína total), migra mais rapidamente.
2. α1-globulinas (α1-antitripsina, α1-glicoproteína ácida, ~2–4%), a fração mais pequena.
3. α2-globulinas (haptoglobina, α2-macroglobulina, ceruloplasmina, ~7–10%).
4. β-globulinas (transferrina, complemento C3, β-lipoproteína, ~8–13%), pode dividir-se em bandas β1 e β2.
5. γ-globulinas (imunoglobulinas IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, ~10–20%), a banda larga e difusa na extremidade catódica.

Procedimento

1. Aplique 5–10 µL de soro no ponto de aplicação num gel de agarose.
2. Eletrofore a 100–200 V durante 20–40 minutos (até a frente de albumina ter migrado 4–6 cm).
3. Fixe o gel em solução ácido-alcoólica para precipitar as proteínas.
4. Cora com Amido Preto, Ponceau S ou Azul de Coomassie.
5. Descor e seque o gel.
6. Digitalize com um densitómetro para produzir um traçado densitométrico quantitativo.
7. Calcule a percentagem de cada fração integrando a área sob a curva.

A proteína total é medida separadamente pelo ensaio do biureto. A concentração absoluta de cada fração é calculada como: percentagem × proteína total.

Interpretação

Padrão normal: um pico de albumina alto e estreito; pequeno pico α1; pico α2 ligeiramente maior; pico(s) β de altura variável; um pico γ-globulina largo e policlonal.

Gamopatia monoclonal: uma banda alta, estreita e em forma de espícula (pico M, proteína monoclonal) aparece mais comumente na região γ, às vezes em β ou α2. O pico M representa uma imunoglobulina monoclonal (geralmente IgG ou IgA) produzida por um único clone de plasmócitos. É a marca do mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenström, gamopatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS) e amiloidose AL.

Hipergamaglobulinemia policlonal: um aumento largo e difuso das γ-globulinas, observado em inflamação crónica, doenças autoimunes (LES, artrite reumatoide), doença hepática crónica e infeção por HIV.

Hipogamaglobulinemia: diminuição das γ-globulinas, observada em imunodeficiências primárias (CVID, agamaglobulinemia ligada ao X), imunodeficiência secundária ou síndrome nefrótica.

Resposta de fase aguda: diminuição da albumina, aumento das α1 e α2 globulinas (α1-antitripsina, haptoglobina). A fração α1 é um marcador precoce sensível de inflamação.

Síndrome nefrótica: diminuição da albumina, aumento das α2 e β globulinas (devido à perda de proteínas pequenas na urina e síntese compensatória de proteínas maiores).

Imunofixação

Se um pico M for detetado ou suspeitado, a imunofixação eletroforética (IFE) é realizada para identificar a cadeia pesada da imunoglobulina (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) e o tipo de cadeia leve (κ, λ). A IFE usa antisoros específicos aplicados a um gel réplica após eletroforese:

O soro do paciente é eletroforetado em seis pistas num gel. Após a eletroforese, um antissoro específico é aplicado a cada pista (anti-γ, anti-α, anti-μ, anti-κ, anti-λ e um controlo fixador). O gel é lavado para remover proteínas não precipitadas, corado e inspecionado. Uma imunoglobulina monoclonal aparece como uma banda discreta numa pista de cadeia pesada e numa pista de cadeia leve, confirmando tanto a identidade como a restrição clonal da cadeia leve.

Eletroforese de Proteínas Urinárias

As proteínas de Bence Jones (cadeias leves monoclonais livres) são detetadas por eletroforese de proteínas urinárias. Como a concentração de cadeias leves na urina pode ser baixa, é tipicamente necessária uma concentração de 50–100× da amostra de urina. A imunofixação da urina é realizada com antisoros anti-κ e anti-λ. A presença de uma cadeia leve monoclonal livre na urina é diagnóstica de mieloma múltiplo de cadeias leves ou amiloidose AL.