El Southern blot es una técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una secuencia específica de ADN en una muestra genómica compleja. Este método, que debe su nombre a su inventor, Edwin Southern, permite a los científicos extraer una sola “frase” de información genética de una biblioteca que contiene millones de palabras. Es el método de referencia para verificar inserciones genéticas e identificar mutaciones genéticas, y fue la base original de la “huella genética del ADN” en la ciencia forense.
Cómo funciona el Southern Blot
Dado que un genoma es tan grande, no se puede simplemente analizarlo en un gel y esperar ver genes individuales; simplemente se vería como una mancha continua. El Southern Blot utiliza cortes precisos y sondas tipo velcro para encontrar el objetivo.
- Digestión
El ADN extraído se trata con enzimas de restricción. Estas tijeras moleculares cortan el ADN solo en secuencias específicas, fragmentando las largas cadenas genómicas en miles de fragmentos más pequeños de longitudes variables.
- Electroforesis
Los fragmentos de ADN se separan por tamaño mediante un gel de agarosa. Los fragmentos pequeños se mueven rápidamente a través del gel, mientras que los grandes permanecen cerca de la superficie. Para que el ADN sea “adherente” para el siguiente paso, el gel se trata con una solución alcalina que desnaturaliza el ADN bicatenario en cadenas simples.
- Transferencia
El ADN se transfiere del frágil gel a una membrana resistente de nailon o nitrocelulosa. Esto se realiza generalmente por capilaridad: una pila de toallas de papel secas absorbe una solución salina a través del gel y la membrana. A medida que el líquido se mueve, arrastra el ADN fuera del gel y lo atrapa permanentemente en la superficie de la membrana.
- Hibridación y detección
La membrana se incuba con una sonda de ADN marcada: un fragmento corto de ADN monocatenario que es la imagen especular exacta de la secuencia diana. La sonda recorre la membrana hasta encontrar su pareja y se adhiere a ella (hibridación). Después de eliminar la sonda sobrante, la membrana se expone a una película de rayos X o a un escáner digital para revelar la ubicación exacta y el tamaño del gen objetivo.
