Isolar uma cultura bacteriana pura a partir de uma amostra mista é o primeiro passo em qualquer fluxo de trabalho microbiológico — seja para diagnóstico clínico, testes de segurança alimentar ou investigação.

Meios de Cultura

As bactérias são cultivadas em formulações ricas em nutrientes que fornecem carbono, azoto, minerais e fontes de energia. Os meios são classificados por composição:

• Meios definidos (sintéticos): cada componente químico é conhecido. Usados para estudos metabólicos.
• Meios complexos: contêm digestos de material animal ou vegetal (peptona, triptona, extrato de levedura). O caldo LB (Luria-Bertani) é o meio complexo mais comum para E. coli.
• Meios seletivos: contêm inibidores (antibióticos, sais biliares, corantes) que suprimem bactérias indesejadas enquanto permitem o crescimento do organismo alvo. Exemplos: ágar MacConkey (seleciona bactérias Gram-negativas), ágar manitol salgado (seleciona estafilococos).
• Meios diferenciais: contêm indicadores que distinguem tipos bacterianos. O ágar MacConkey é simultaneamente seletivo e diferencial — fermentadores de lactose tornam-se rosa, não fermentadores permanecem incolores.
• Meios enriquecidos: suplementados com sangue, soro ou fatores de crescimento para suportar organismos fastidiosos. O ágar sangue (5% de sangue de carneiro) é o meio enriquecido mais comum.

Esgotamento por Estrias

O método de estrias em quadrantes isola colónias individuais a partir de uma cultura mista:

1. Esterilize uma ansa de inoculação aquecendo até rubro e depois arrefeça tocando na borda estéril do ágar.
2. Recolha uma pequena quantidade da amostra bacteriana.
3. Estrie o primeiro quadrante num padrão de ziguezague apertado.
4. Flameie a ansa, arrefeça e arraste através do primeiro quadrante para o segundo.
5. Repita para o terceiro e quarto quadrantes, flameando entre cada um.
6. Incube invertido à temperatura apropriada (37 °C para a maioria dos patogénios, 30 °C para isolados ambientais).

Após incubação, colónias isoladas aparecem ao longo das estrias dos quadrantes finais onde a densidade celular é mais baixa.

Técnica de Plaqueamento em Superfície e em Profundidade

A técnica de plaqueamento em superfície distribui uma suspensão bacteriana diluída uniformemente pela superfície de uma placa de ágar usando um espalhador de vidro estéril. É usada para quantificar contagens bacterianas (UFC/mL).

A técnica de plaqueamento em profundidade mistura a amostra diluída com ágar fundido antes de verter na placa. As colónias crescem tanto na superfície como dentro do ágar. É útil para contar organismos tolerantes ao calor e para detetar baixos números de organismos.

Condições de Incubação

A incubação padrão é a 37 °C ao ar durante 18–24 horas. As variações incluem:

• Capnofílico: 5–10% de CO₂ (alguns patogénios, ex.: Neisseria).
• Anaeróbico: atmosfera sem oxigénio usando uma jarra ou câmara anaeróbica (ex.: Clostridium, Bacteroides).
• Microaerofílico: baixo oxigénio, CO₂ elevado (ex.: Campylobacter).
• Termofílico: 55–60 °C (Thermus aquaticus).