Isolar uma cultura bacteriana pura a partir de uma amostra mista é o primeiro passo em qualquer fluxo de trabalho microbiológico, seja para diagnóstico clínico, testes de segurança alimentar ou investigação.

Meios de Cultura

As bactérias são cultivadas em formulações ricas em nutrientes que fornecem carbono, azoto, minerais e fontes de energia. Os meios são classificados por composição:

• Meios definidos (sintéticos): cada componente químico é conhecido. Usados para estudos metabólicos.
• Meios complexos: contêm digestos de material animal ou vegetal (peptona, triptona, extrato de levedura). O caldo LB (Luria-Bertani) é o meio complexo mais comum para E. coli.
• Meios seletivos: contêm inibidores (antibióticos, sais biliares, corantes) que suprimem bactérias indesejadas enquanto permitem o crescimento do organismo alvo. Exemplos: ágar MacConkey (seleciona bactérias Gram-negativas), ágar manitol salgado (seleciona estafilococos).
• Meios diferenciais: contêm indicadores que distinguem tipos bacterianos. O ágar MacConkey é simultaneamente seletivo e diferencial, fermentadores de lactose tornam-se rosa, não fermentadores permanecem incolores.
• Meios enriquecidos: suplementados com sangue, soro ou fatores de crescimento para suportar organismos fastidiosos. O ágar sangue (5% de sangue de carneiro) é o meio enriquecido mais comum.

Esgotamento por Estrias

O método de estrias em quadrantes isola colónias individuais a partir de uma cultura mista:

1. Esterilize uma ansa de inoculação aquecendo até rubro e depois arrefeça tocando na borda estéril do ágar.
2. Recolha uma pequena quantidade da amostra bacteriana.
3. Estrie o primeiro quadrante num padrão de ziguezague apertado.
4. Flameie a ansa, arrefeça e arraste através do primeiro quadrante para o segundo.
5. Repita para o terceiro e quarto quadrantes, flameando entre cada um.
6. Incube invertido à temperatura apropriada (37 °C para a maioria dos patogénios, 30 °C para isolados ambientais).

Após incubação, colónias isoladas aparecem ao longo das estrias dos quadrantes finais onde a densidade celular é mais baixa.

Técnica de Plaqueamento em Superfície e em Profundidade

A técnica de plaqueamento em superfície distribui uma suspensão bacteriana diluída uniformemente pela superfície de uma placa de ágar usando um espalhador de vidro estéril. É usada para quantificar contagens bacterianas (UFC/mL).

A técnica de plaqueamento em profundidade mistura a amostra diluída com ágar fundido antes de verter na placa. As colónias crescem tanto na superfície como dentro do ágar. É útil para contar organismos tolerantes ao calor e para detetar baixos números de organismos.

Condições de Incubação

A incubação padrão é a 37 °C ao ar durante 18–24 horas. As variações incluem:

• Capnofílico: 5–10% de CO₂ (alguns patogénios, ex.: Neisseria).
• Anaeróbico: atmosfera sem oxigénio usando uma jarra ou câmara anaeróbica (ex.: Clostridium, Bacteroides).
• Microaerofílico: baixo oxigénio, CO₂ elevado (ex.: Campylobacter).
• Termofílico: 55–60 °C (Thermus aquaticus).