O esfregaço de sangue periférico (PBS) é uma técnica laboratorial fundamental que fornece confirmação visual de resultados automatizados de CBC e permite a detecção de anormalidades morfológicas que os analisadores não conseguem identificar com segurança. Todo cientista de laboratório médico deve dominar a preparação, coloração e exame sistemático do esfregaço de sangue.
Preparação de um esfregaço de qualidade
Um esfregaço em cunha é preparado colocando uma pequena gota de sangue anticoagulado com EDTA (ou sangue capilar) perto de uma extremidade de uma lâmina de vidro limpa. Uma segunda lâmina espalhadora é mantida em um ângulo de 30 a 45°, apoiada na gota até que o sangue se espalhe ao longo de sua borda e, em seguida, empurrada suavemente para frente para criar uma borda emplumada. O esfregaço ideal tem uma transição gradual de espesso para fino, com a borda enevoada ocupando 1–2 cm do comprimento da lâmina. O esfregaço deve ser seco rapidamente ao ar agitando a lâmina. Artefatos comuns incluem buracos (sangue gorduroso, secagem lenta), espessura irregular (pressão irregular do espalhador) e cauda longa (ângulo do espalhador muito baixo). O esfregaço é então fixado em metanol absoluto durante 30 segundos antes da coloração.
Coloração de Wright-Giemsa
As colorações do tipo Romanowsky (combinação Wright, Giemsa ou Wright-Giemsa) são o padrão para coloração de esfregaços de sangue. Essas colorações contêm azul B (básico, cora os ácidos nucléicos em azul-púrpura) e eosina Y (ácida, cora a hemoglobina e os grânulos eosinofílicos em vermelho-alaranjado). O protocolo de coloração envolve inundar o esfregaço fixado com corante de Wright durante 1–2 minutos e, em seguida, adicionar solução tampão durante 2–4 minutos para promover coloração diferencial, seguido de enxaguamento com água. Esfregaços adequadamente corados mostram eritrócitos rosa-avermelhados, núcleos e RNA azul-púrpura e grânulos de cores distintas. A coloração excessiva produz cores escuras e turvas; a coloração produz células pálidas e pouco diferenciadas.
Exame Sistemático de Esfregaço
O exame começa com potência baixa (objetiva de 10×) para avaliar a qualidade geral, selecionar a área de contagem ideal e identificar anormalidades na distribuição de leucócitos (efeito de borda na linfocitose ou LLC), aglomerados de plaquetas na borda emplumada e rouleaux ou aglutinação de hemácias. A avaliação diferencial e morfológica dos leucócitos é realizada com imersão em óleo de 50× ou 100× na zona de contagem – a área onde os glóbulos vermelhos se sobrepõem ligeiramente sem empilhamento. Pelo menos 100 leucócitos são contados e classificados para o diferencial manual. O exame abrange três aspectos em sequência: estimativa e morfologia das plaquetas, morfologia dos glóbulos vermelhos (tamanho, forma, cor, inclusões) e morfologia e diferencial dos leucócitos.
Avaliação Morfológica de RBC
Anormalidades no formato dos eritrócitos (poiquilócitos) fornecem pistas diagnósticas. Esferócitos (pequenos, densos, sem palidez central) sugerem esferocitose hereditária ou AIHA. Esquistócitos (células fragmentadas) indicam anemia hemolítica microangiopática (TTP, SHU, DIC). As células falciformes confirmam a doença falciforme. As células-alvo são observadas na talassemia, doença hepática e doença HbC. Os eliptócitos sugerem eliptocitose hereditária. Células em forma de lágrima (dacrócitos) com hemácias nucleadas sugerem mielofibrose ou infiltração medular. Acantócitos (células estimuladoras) ocorrem na doença hepática e na abetalipoproteinemia. Equinócitos (células rebarbas) são frequentemente artefatos, mas podem indicar uremia. As inclusões de hemácias incluem pontilhado basofílico (envenenamento por chumbo, talassemia), corpos de Howell-Jolly (pós-esplenectomia, anemia megaloblástica), corpos de Pappenheimer (anemia sideroblástica, talassemia) e anéis de Cabot (anemia megaloblástica, mielodisplasia).
Avaliação Morfológica WBC
Além da contagem diferencial, são observadas características morfológicas dos leucócitos. Granulação tóxica (grânulos de neutrófilos grossos e escuros), corpos de Döhle (inclusões citoplasmáticas azul-claras) e vacuolização indicam infecção ou inflamação. Neutrófilos hipersegmentados (> 5 lobos) sugerem anemia megaloblástica. A anomalia de Pelger-Huët (núcleos pince-nez bilobados) é uma condição hereditária benigna, mas pode ser adquirida na mielodisplasia. Os blastos são identificados por alta proporção nuclear-citoplasmática, cromatina aberta, nucléolos proeminentes e citoplasma basofílico, e sua presença desencadeia investigação adicional por citometria de fluxo. Linfócitos atípicos (citoplasma basofílico grande e abundante, núcleo recortado) são característicos da infecção por EBV.
Estimativa e Morfologia de Plaquetas
A contagem de plaquetas é estimada a partir do esfregaço contando as plaquetas em 10 campos de imersão em óleo e multiplicando por 15–20 × 10⁹/L. Isto fornece uma verificação rápida da contagem automatizada. São observadas plaquetas gigantes, plaquetas cinzentas (sem grânulos) ou aglomerados de plaquetas. A presença de megatrombócitos sugere aumento da renovação plaquetária, conforme observado em PTI.
Relatórios e Correlação
O relatório PBS deve descrever a qualidade do esfregaço, as contagens celulares estimadas e todas as anomalias morfológicas utilizando terminologia padronizada. Os resultados são correlacionados com os parâmetros de hemograma completo automatizados e com informações clínicas. O PBS geralmente conduz testes adicionais, como eletroforese de hemoglobina, ensaios enzimáticos de hemácias, citometria de fluxo ou análise citogenética.
