Amyloid, Pigmente und Mineralablagerungen reichern sich bei einer Vielzahl von Krankheiten im Gewebe an. Ihre histochemische Identifizierung liefert spezifische Diagnosen, die mit keiner anderen Technik oft nicht gestellt werden können.

Kongorot für Amyloid

Kongorot ist die standardmäßige histochemische Färbung für Amyloid. In alkalischer Lösung bindet Kongorot durch Interkalation zwischen benachbarten Betasträngen an die Beta-Faltblattstruktur von Amyloidfibrillen. Unter dem Hellfeldmikroskop färben sich Amyloidablagerungen lachsrosa bis rot. Der diagnostische Befund ist apfelgrüne Doppelbrechung unter gekreuzten Polarisatoren – das Ergebnis der Ausrichtung von Kongorot-Molekülen entlang der Amyloidfibrillen, die ihrerseits in einer hochgeordneten, doppelbrechenden Anordnung angeordnet sind.

Amyloidtypen (AL, AA, ATTR, Aβ usw.) können nicht allein durch Kongorot unterschieden werden – IHC für Amyloidsubtypen (Kappa- und Lambda-Leichtketten, Serumamyloid A, Transthyretin, Beta-Amyloid) oder Massenspektrometrie ist für die Typisierung erforderlich. Die Empfindlichkeit für Kongorot ist bei großen Ablagerungen hoch, kann jedoch frühe oder kleine Ablagerungen übersehen – untersuchen Sie mehrere Abschnitte unter Polarisation. Eine falsch positive Kongorot-Bindung kann in elastischen Fasern, Kollagen und Hyalin auftreten – nur die Doppelbrechung von Apfelgrün bestätigt Amyloid.

Thioflavin T

Thioflavin T ist ein Fluoreszenzfarbstoff, der Amyloid bindet und eine verstärkte Fluoreszenz mit einer charakteristischen Emissionsverschiebung zeigt. Es ist empfindlicher als Kongorot beim Nachweis kleiner Amyloidablagerungen, erfordert jedoch ein Fluoreszenzmikroskop und ist weniger spezifisch. Kongorot bleibt der Goldstandard für die Amyloiddiagnose.

Perls’ Preußischblau für Eisen

Perls’ Berliner Blau erkennt Eisen (Fe3+) in Gewebeschnitten. Die Schnitte werden mit Salzsäure und Kaliumferrocyanid behandelt; Eisenionen reagieren mit Ferrocyanid unter Bildung von unlöslichem Berliner Blau (Eisenferrocyanid). Bei der Reaktion entsteht an der Eisenstelle ein blauer Niederschlag. Der Hintergrund wird typischerweise mit nuklearem Echtrot gegengefärbt.

Die Perls-Färbung identifiziert Hämosiderin (aggregiertes Ferritin) bei Eisenüberladung: hereditäre Hämochromatose (Hepatozyten-Eisen), transfusionsbedingte Siderose, alkoholische Lebererkrankung und hämolytische Anämien. Im Knochenmark klassifiziert Perls färbbares Eisen (Skala 0–6). In der Lunge weist Perls Herzinsuffizienzzellen (Hämosiderin-beladene Makrophagen) in der Lungenstauung nach und bestätigt eine Lungenhämosiderose. In Milz und Lymphknoten sind Eisenablagerungen nach Blutungen oder Infarkten leicht zu erkennen.

Von Kossa für Kalzium

Die Von-Kossa-Färbung erkennt Kalziumablagerungen, indem sie Kalzium in unlöslichen Kalziumsalzen (Phosphat, Karbonat) durch Silberionen ersetzt. Unter ultraviolettem oder hellem Licht wird das Silber zu metallischem Silber reduziert und erscheint schwarz oder braun. Der Hintergrund ist mit nuklearem Echtrot oder Van Gieson gegengefärbt.

Von Kossa wird verwendet, um pathologische Verkalkungen nachzuweisen: dystrophische Verkalkungen in nekrotischem Gewebe, Tumoren (Psammomkörper beim Meningeom, papilläres Schilddrüsenkarzinom, seröses Ovarialkarzinom), verkalkte Herzklappen und verkalkte Tendinitis. Es identifiziert auch metastasierende Verkalkung (Kalziumablagerung in normalem Gewebe aufgrund von Hyperkalzämie) in Nieren, Lunge und Magenschleimhaut. Von Kossa erkennt kein Calciumoxalat – verwenden Sie für Oxalat Alizarin Red S bei pH 4,0 oder polarisiertes Licht (Oxalatkristalle sind doppelbrechend).

Alizarinrot S für Kalzium

Alizarin Red S bildet mit Calciumionen bei alkalischem pH-Wert (4,0–4,5) einen orangeroten Niederschlag. Es ist spezifischer für Kalzium als Von Kossa und weist sowohl Kalziumphosphat als auch Kalziumoxalat nach. Alizarinrot wird zur Identifizierung von Kalziumablagerungen in Weichteilen, Gefäßverkalkungen und Nephrokalzinose verwendet. Es ist auch die Standardfärbung zur Identifizierung von Kalzium in histologischen Schnitten von Knochen und Zähnen.

Bilirubin und Gallenflecken

Fouchet-Färbung (Trichloressigsäure und Eisenchlorid) oxidiert Bilirubin zu Biliverdin, dann grün/blau zur smaragdgrünen Farbe der Galle. Es wird verwendet, um intrahepatische und extrahepatische Cholestase in Leberbiopsien und Gallenthromben in Canaliculi zu identifizieren. Hall-Färbung (Van Gieson mit Fouchet) färbt gleichzeitig Galle (grün/blau) und Kollagen (rot). Gallenfarbstoff muss von Lipofuscin (Alterspigment) und Hämosiderin unterschieden werden – Perls‘ Färbung färbt Eisenblau, und PAS färbt Lipofuszin unterschiedlich.

Melaninbleiche

Melanin ist ein endogenes braunschwarzes Pigment, das zelluläre Details und die IHC-Interpretation verdecken kann. Melaninbleiche (Kaliumpermanganat, gefolgt von Oxalsäure) entfernt Melanin, ohne die Gewebemorphologie oder Antigenität zu beeinträchtigen, und ermöglicht so die Beurteilung zellulärer Details unter starken Melaninablagerungen. Gebleichte Abschnitte können nach der Protokolloptimierung für IHC verwendet werden.

Qualitätskontrolle

Für jede Spezialfärbung müssen gleichzeitig entsprechende Positivkontrollen durchgeführt werden: amyloidhaltiges Gewebe (Kongorot), eisenüberladene Leber (Perls), verkalkte Arterie (Von Kossa) und mit Galle gefärbte Leber (Fouchet). Ein Steuerungsfehler macht den Lauf ungültig. Es gelten Standardverfahren zur Fehlerbehebung – wenn die Kontrollen schwach sind, überprüfen Sie die Frische der Reagenzien, den pH-Wert und die Inkubationszeiten.