O teste de suscetibilidade antimicrobiana (AST) é essencial na microbiologia clínica para selecionar a terapia antibiótica apropriada e monitorar as tendências de resistência. Determina se um isolado bacteriano é suscetível, intermediário ou resistente a agentes antimicrobianos específicos.

Método de difusão em disco (Kirby-Bauer)

Discos de papel de filtro impregnados com concentrações padronizadas de antibióticos são colocados em uma placa de ágar inoculada com o organismo teste com uma turbidez definida (padrão McFarland 0,5). Após 16-24 horas de incubação, as zonas de inibição são medidas em milímetros e comparadas com as tabelas de pontos de interrupção CLSI ou EUCAST. O resultado é relatado como Suscetível (S), Intermediário (I) ou Resistente (R), com o tamanho da zona correlacionando-se inversamente com a concentração inibitória mínima (CIM). Este método é simples, barato e flexível (qualquer disco de antibiótico pode ser testado), mas não é adequado para organismos de crescimento lento ou exigentes e é qualitativo e não quantitativo.

Métodos de diluição em caldo

A microdiluição em caldo é realizada em placas de microtitulação de 96 poços com diluições duplas em série de antibióticos em caldo Mueller-Hinton. Cada poço é inoculado com aproximadamente 5x10^5 UFC/mL, e a MIC é a menor concentração de antibiótico que inibe o crescimento bacteriano visível após 16-20 horas de incubação. A macrodiluição em caldo utiliza o mesmo princípio em tubos de ensaio e é adequada para números menores de isolados. Os valores de CIM fornecem dados quantitativos úteis para análise farmacocinética/farmacodinâmica (PK/PD) e detecção de resistência de baixo nível.

Diluição de ágar

Placas de ágar contendo diluições seriadas de antibióticos são inoculadas com uma suspensão bacteriana padronizada usando um replicador (inoculador multiponto Steers ou Denley). A MIC é lida como a concentração mais baixa que inibe completamente o crescimento, e múltiplos isolados (até 36) podem ser testados simultaneamente numa única placa. Este método é considerado o padrão de referência para determinação da CIM, particularmente para organismos exigentes e anaeróbios.

Difusão de gradiente (Etest)

Uma tira plástica com um gradiente antibiótico contínuo predefinido de um lado e uma escala de leitura de MIC do outro é colocada em uma placa de ágar inoculada. Após a incubação, uma zona elíptica de inibição cruza a tira no valor MIC, lido diretamente na escala. Este método combina a conveniência da difusão em disco com dados quantitativos de CIM e é útil para isolados únicos ou quando a diluição em caldo é impraticável.

Sistemas Automatizados

Vitek 2 (bioMerieux), BD Phoenix e MicroScan WalkAway automatizam AST usando microdiluição em caldo miniaturizado em painéis proprietários com detecção de crescimento por turbidez ou fluorescência. Os resultados normalmente ficam disponíveis em 4 a 12 horas, significativamente mais rápido do que os métodos manuais. Os sistemas automatizados incluem regras especializadas integradas para detectar padrões de resistência incomuns e sugerir ações corretivas.

Testes Especializados

A detecção de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL) utiliza um teste de disco combinado com cefotaxima e ceftazidima com e sem ácido clavulânico; um aumento ≥5 mm no diâmetro da zona confirma a produção de ESBL. A detecção de carbapenemases é realizada usando o método de inativação de carbapenêmicos modificado (mCIM) e CIM modificado por EDTA (eCIM) para distinguir serina e metalocarbapenemases. A resistência indutível à clindamicina (teste D) envolve a colocação de discos de eritromicina e clindamicina separados por 15-20 mm; o achatamento da zona de clindamicina (em forma de D) indica resistência indutível a macrólidos-lincosamida-estreptogramina B (MLSB). A determinação da CIM da vancomicina por microdiluição em caldo ou Etest é preferida para detectar S. aureus intermediário à vancomicina (VISA) e VISA heterogêneo (hVISA).

Interpretação e Relevância Clínica

Os pontos de corte clínicos são estabelecidos pelo CLSI (Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais) e pelo EUCAST (Comitê Europeu de Testes de Suscetibilidade Antimicrobiana) com base em distribuições de MIC, dados de PK/PD e resultados clínicos. Um resultado Susceptível (S) indica uma elevada probabilidade de sucesso terapêutico com a dosagem padrão; Resistente (R) indica alta probabilidade de falha terapêutica; e Intermediário (I) indica eficácia incerta, exigindo potencialmente doses mais altas ou vias alternativas. Os resultados do AST orientam a terapia direcionada, reduzindo o uso de antibióticos de amplo espectro e retardando o desenvolvimento de resistência. Os dados cumulativos de AST (antibiogramas) são usados para epidemiologia local, decisões de formulários e controle de infecção.