L’analyse phytochimique implique l’extraction systématique, la séparation et la caractérisation des composés bioactifs du matériel végétal. Les métabolites secondaires des plantes incluent les alcaloïdes, flavonoïdes, terpénoïdes, acides phénoliques, saponines et tanins, dont beaucoup ont des applications pharmaceutiques, nutritionnelles et industrielles.
L’extraction est la première étape critique. La macération consiste à tremper la matière végétale en poudre dans un solvant à température ambiante avec une agitation occasionnelle. La percolation utilise un flux continu de solvant à travers la matière végétale. L’extraction Soxhlet fait circuler du solvant chaud à travers l’échantillon pour une extraction exhaustive. L’extraction assistée par ultrasons utilise la cavitation pour rompre les parois cellulaires et améliorer le transfert de masse. L’extraction par fluide supercritique au CO2 fournit une extraction sélective et sans solvant des composés non polaires.
La sélection du solvant suit les principes de dissolution des semblables. L’hexane et le dichlorométhane extraient les composés non polaires comme les cires et les huiles essentielles. L’éthanol et le méthanol extraient les composés de polarité moyenne comme les flavonoïdes et les alcaloïdes. L’eau extrait les composés polaires comme les tanins et les glycosides. L’extraction séquentielle avec des solvants de polarité croissante fractionne l’extrait par classe de composés.
Le criblage phytochimique utilise des réactions colorimétriques qualitatives pour détecter les classes de composés. Le test de Dragendorff détecte les alcaloïdes. Le test de Shinoda détecte les flavonoïdes. Le test de Liebermann-Burchard détecte les terpénoïdes et les stérols. Le test au chlorure ferrique détecte les composés phénoliques. Ces tests fournissent des informations préliminaires sur la composition chimique.
L’analyse quantitative détermine la concentration de phytochimiques spécifiques. La teneur phénolique totale est mesurée par la méthode de Folin-Ciocalteu avec des équivalents d’acide gallique. La teneur totale en flavonoïdes utilise la méthode colorimétrique au chlorure d’aluminium. La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) avec détection UV, à barrette de diodes ou par spectrométrie de masse quantifie les composés individuels. La chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS) est utilisée pour les composés volatils.
L’élucidation structurale des composés purifiés utilise la spectroscopie par résonance magnétique nucléaire (RMN), la spectrométrie de masse, la spectroscopie infrarouge et la cristallographie aux rayons X. La déréplication par HPLC-MS et la recherche dans les bases de données identifie les composés connus et concentre les efforts sur les structures nouvelles.
