La manipulation précise des liquides est l’opération manuelle la plus fréquente dans tout laboratoire. Les erreurs à cette étape se propagent à travers chaque étape suivante, rendant la technique de pipetage et la préparation de solutions essentielles pour la reproductibilité.

Principes du Pipetage

Les pipettes à déplacement d’air fonctionnent en créant un coussin d’air entre le piston et le liquide. Le volume est réglé mécaniquement ou numériquement, et le piston déplace un volume d’air correspondant pour aspirer ou distribuer le liquide.

Pour un pipetage précis, tenez la pipette verticalement pendant l’aspiration. Immergez l’embout 2–4 mm sous le ménisque pour les volumes microlitriques, plus profondément pour les volumes plus grands. Enfoncez le piston jusqu’au premier arrêt, aspirez le liquide lentement et régulièrement, puis retirez l’embout le long de la paroi du récipient. Distribuez en enfonçant jusqu’au premier arrêt, faites une pause, puis enfoncez jusqu’au deuxième arrêt pour expulser tout liquide restant.

Erreurs de Pipetage Courantes

• Pré-humidification : aspirer et distribuer le liquide 2–3 fois avant le transfert réel humidifie le coussin d’air et réduit les pertes par évaporation.
• Effets de température : le coussin d’air se dilate ou se contracte avec la température. La pipette et le liquide doivent être à température ambiante.
• Liquides visqueux : le pipetage inversé (enfoncer jusqu’au deuxième arrêt pour l’aspiration, distribuer jusqu’au premier arrêt) améliore la précision pour les solutions visqueuses ou moussantes.
• Sélection des embouts : utilisez l’embout correct pour la marque de pipette. Les embouts à faible rétention réduisent la perte d’échantillon pour les protéines et les détergents.

Préparation de Solutions

Les solutions en pourcentage masse/volume sont préparées en dissolvant une masse pesée de soluté dans le solvant et en complétant au volume final. Les solutions molaires sont préparées en calculant les moles à partir du poids moléculaire, en dissolvant et en ajustant au volume dans une fiole jaugée.

Ajoutez toujours le soluté à un volume partiel de solvant, agitez pour dissoudre, puis complétez au trait de jauge. N’ajoutez jamais de solvant à un soluté sec dans une fiole jaugée — le volume pourrait dépasser le trait.

Dilutions en Série et Solutions Mères

Une solution mère est une solution concentrée qui est diluée à la concentration de travail. Le facteur de dilution est le rapport du volume final au volume d’aliquot :

C₁V₁ = C₂V₂

Les dilutions en série sont une série de dilutions par étapes où chaque étape dilue par un facteur constant (généralement 10 fois ou 2 fois). C’est le moyen le plus efficace de produire une gamme de concentrations logarithmique pour les courbes standard, les tests de CMI ou les tests de cytotoxicité.

Lors de la préparation d’une série de dilutions, mélangez soigneusement à chaque étape et changez l’embout de pipette entre les transferts pour éviter le report.