A hematoxilina e eosina (H&E) é a coloração mais amplamente usada em histopatologia, aplicada a virtualmente toda seção de tecido diagnóstico. Compreender sua química, variações de formulação e problemas comuns é essencial para produzir lâminas diagnósticas consistentemente de alta qualidade.
Química da Hematoxilina
A hematoxilina é um corante natural extraído do cerne do pau-de-campeche (Haematoxylon campechianum). Não é por si só um corante — deve ser oxidada a hemateína, o agente corante ativo. A oxidação ocorre naturalmente com exposição ao ar e luz (maturação) ou artificialmente usando oxidantes químicos (iodato de sódio, óxido mercúrico). A hemateína liga-se a mordentes metálicos (alumínio, ferro, tungstênio) para formar complexos de laca coloridos que se ligam a componentes teciduais.
Hematoxilinas de alúmen (Harris, Gill, Mayer, Gill II) usam sais de alumínio como mordentes e coram núcleos em azul. A hematoxilina de Harris usa óxido mercúrico como oxidante e é maturada; produz detalhe nuclear nítido, mas requer filtração antes do uso para remover mercúrio precipitado. A hematoxilina de Gill usa iodato de sódio como oxidante químico e está pronta para uso sem maturação — é mais estável e produz resultados consistentes. A hematoxilina de Mayer é semelhante, mas mais diluída, exigindo tempos de coloração mais longos.
Química da Eosina
A eosina é um corante xanteno disponível em duas formas: eosina Y (amarelada, mais comum) e eosina B (azulada). A eosina Y é solúvel em água e usada em soluções aquosas ou alcoólicas. É um corante ácido que se liga a componentes teciduais básicos (catiônicos) — proteínas citoplasmáticas, colágeno, glóbulos vermelhos e grânulos secretores. As soluções de eosina tipicamente contêm ácido acético para realçar a coloração dos glóbulos vermelhos e prevenir a supercoloração do colágeno.
Protocolo de Coloração H&E
O colorador automático de H&E processa lâminas através de banhos sequenciais: desparafinização (xileno, 3 trocas), hidratação (etanóis graduados 100% a 70%, depois água), hematoxilina (3-8 minutos dependendo da formulação e intensidade desejada), azulamento (água de Scott ou água amoniacal, que desloca a hematoxilina de vermelho para azul em pH alcalino), eosina (1-3 minutos), desidratação (etanóis graduados 70% a 100%), clarificação (xileno) e montagem com meio de montagem permanente. O tempo total de ciclo em um colorador automático é de aproximadamente 30-45 minutos.
Solução de Problemas da H&E
Coloração nuclear pálida ou fraca — a hematoxilina pode estar exaurida (substituir), a concentração do mordente pode estar baixa ou o tempo de coloração é insuficiente. Verifique se a hematoxilina foi oxidada além de sua vida útil (hematoxilina supermaturada torna-se marrom escura e cora mal). A superdescalcificação de espécimes ósseos também reduz a basofilia nuclear.
Núcleos turvos ou supercorados — tempo de coloração da hematoxilina muito longo, etapa de azulamento insuficiente ou solução de hematoxilina muito concentrada. Diferencie de espessura de seção muito espessa (seções devem ser de 3-5 µm).
Eosina sobrepujando a hematoxilina — concentração de eosina muito alta, pH da eosina muito ácido ou hematoxilina muito fraca. Reduza o tempo de eosina ou aumente o tempo de hematoxilina. Intensidade variável de eosina através da seção sugere processamento tecidual irregular.
Tons azuis excessivos — diferenciação insuficiente em álcool ácido (HCl a 1% em etanol a 70%) ou tempo de eosina inadequado. Verifique se o álcool ácido não foi exaurido.
Coloração nuclear e citoplasmática ambas fracas — espessura da seção muito fina (menos de 3 µm), tecido superfixado em formalina ou desparafinização inadequada (arraste de xileno para a hematoxilina aquosa).
Controle de Qualidade
O CQ diário para H&E inclui uma lâmina de controle (tecido com detalhe nuclear e citoplasmático conhecido — tonsila ou cólon), avaliação do contraste nuclear/citoplasmático, uniformidade através da lâmina, ausência de precipitado e montagem adequada sem bolhas. Documente os resultados do CQ e ações corretivas. As soluções de H&E devem ser trocadas em um cronograma (hematoxilina a cada 1-2 semanas ou após 500-1000 lâminas; eosina a cada 1-2 semanas). A manutenção regular do equipamento de coloração — limpeza dos racks, verificação dos níveis de fluido, calibração dos temporizadores — previne falhas em lote.
