La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est l’une des techniques analytiques les plus utilisées en science alimentaire, offrant une séparation et une quantification robustes des composés non volatils et thermiquement labiles. Le choix entre la chromatographie en phase normale et en phase inversée dépend de la polarité de l’analyte : la phase inversée (C18, C8) domine pour les composés de polarité moyenne à faible tels que les vitamines, les polyphénols et les conservateurs, tandis que les colonnes en phase normale et HILIC sont préférées pour les analytes hautement polaires comme les sucres et les acides organiques. La sélection des colonnes implique également la taille des particules (inférieure à 2 µm pour l’UHPLC), la taille des pores et la chimie de la phase liée.
La sélection du détecteur détermine la sensibilité et la sélectivité. Les détecteurs UV-Vis et à barrette de diodes (DAD) sont standards pour les composés chromophores, tandis que l’indice de réfraction (RID) est utilisé pour les sucres et les analytes n’absorbant pas les UV. Les détecteurs à fluorescence offrent une sensibilité beaucoup plus élevée pour les aflatoxines et les vitamines, et la détection MS fournit une confirmation structurelle. Les domaines d’application comprennent l’analyse quantitative des sucres (HILIC-RID ou ELSD), des vitamines hydrosolubles et liposolubles, des édulcorants artificiels (aspartame, acésulfame-K), des conservateurs (benzoates, sorbates), des polyphénols présents dans le vin et le thé et des mycotoxines (aflatoxines, ochratoxine A) avec détection par fluorescence ou MS.
La préparation des échantillons est essentielle pour obtenir des résultats HPLC fiables. L’extraction en phase solide (SPE) à l’aide d’absorbants C18, échangeurs d’ions ou en mode mixte concentre les analytes et élimine les interférences matricielles. Une dérivatisation peut être nécessaire pour les analytes dépourvus de chromophores ou de fluorescence, tels que les acides aminés (OPA/FMOC) ou les acides gras. Les paramètres de validation de la méthode incluent la linéarité, la précision, l’exactitude, la limite de détection (LOD) et la limite de quantification (LOQ), conformément aux directives ICH ou FDA. Les tests d’adéquation du système (temps de rétention RSD, facteur de traînée, plaques théoriques) garantissent des performances constantes.
Les tendances modernes incluent la LC ultra-haute performance (UHPLC) avec des particules inférieures à 2 µm pour des séparations plus rapides, la LC bidimensionnelle (LC×LC) pour les matrices alimentaires complexes et la césure avec spectrométrie de masse haute résolution pour un profilage non ciblé. Les approches HPLC verte utilisant des phases mobiles éthanol-eau et des colonnes plus courtes gagnent du terrain dans les laboratoires de contrôle qualité. La HPLC complète la chromatographie en phase gazeuse pour les analytes non volatils et est souvent couplée à la spectrométrie de masse pour confirmation. Les applications incluent l’analyse des mycotoxines et la détection des amines biogéniques.
