L’amyloïde, les pigments et les dépôts minéraux s’accumulent dans les tissus dans un large éventail de maladies. Leur identification histochimique fournit des diagnostics spécifiques qui ne peuvent souvent être posés par aucune autre technique.

Rouge Congo pour l’Amyloïde

Le Rouge Congo est la coloration histochimique standard pour l’amyloïde. En solution alcaline, le Rouge Congo se lie à la structure en feuillet bêta des fibrilles amyloïdes par intercalation entre les brins bêta adjacents. Sous microscopie à champ clair, les dépôts d’amyloïde se colorent en rose saumon à rouge. Le résultat diagnostique est la biréfringence vert-ponme sous polariseurs croisés — résultant de l’alignement des molécules de Rouge Congo le long des fibrilles amyloïdes, elles-mêmes disposées en un réseau hautement ordonné et biréfringent.

Les types d’amyloïde (AL, AA, ATTR, Aβ, etc.) ne peuvent pas être distingués par le Rouge Congo seul — l’IHC pour les sous-types d’amyloïde (chaînes légères kappa et lambda, amyloïde sérique A, transthyrétine, bêta-amyloïde) ou la spectrométrie de masse est nécessaire pour le typage. La sensibilité du Rouge Congo est élevée pour les grands dépôts mais peut manquer les dépôts précoces ou petits — examiner plusieurs coupes sous polarisation. Une liaison faussement positive du Rouge Congo peut survenir dans les fibres élastiques, le collagène et l’hyaline — seule la biréfringence vert-ponme confirme l’amyloïde.

Thioflavine T

La Thioflavine T est un colorant fluorescent qui se lie à l’amyloïde et montre une fluorescence accrue avec un déplacement d’émission caractéristique. Elle est plus sensible que le Rouge Congo pour détecter les petits dépôts d’amyloïde mais nécessite un microscope à fluorescence et est moins spécifique. Le Rouge Congo reste l’étalon-or pour le diagnostic de l’amyloïde.

Bleu de Prusse de Perls pour le Fer

Le Bleu de Prusse de Perls détecte le fer ferrique (Fe3+) dans les coupes tissulaires. Les coupes sont traitées avec de l’acide chlorhydrique et du ferrocyanure de potassium ; les ions ferriques réagissent avec le ferrocyanure pour former du bleu de Prusse insoluble (ferrocyanure ferrique). La réaction produit un précipité bleu au site du fer. Le fond est généralement contre-coloré avec du rouge nucléaire rapide.

La coloration de Perls identifie l’hémosidérine (ferritine agrégée) dans les conditions de surcharge en fer : hémochromatose héréditaire (fer hépatocytaire), sidérose transfusionnelle, maladie alcoolique du foie et anémies hémolytiques. Dans la moelle osseuse, Perls gradue le fer colorable (échelle 0-6). Dans le poumon, Perls démontre les cellules d’insuffisance cardiaque (macrophages chargés d’hémosidérine) dans la congestion pulmonaire et confirme l’hémosidérose pulmonaire. Dans la rate et les ganglions lymphatiques, la déposition de fer après hémorragie ou infarctus est facilement identifiée.

Von Kossa pour le Calcium

La coloration de Von Kossa détecte les dépôts de calcium en substituant les ions argent au calcium dans les sels de calcium insolubles (phosphate, carbonate). Sous lumière ultraviolette ou lumière vive, l’argent est réduit en argent métallique, apparaissant noir ou brun. Le fond est contre-coloré avec du rouge nucléaire rapide ou du van Gieson.

Von Kossa est utilisé pour démontrer la calcification pathologique : calcification dystrophique dans les tissus nécrotiques, tumeurs (corps psammomateux dans le méningiome, le carcinome papillaire de la thyroïde, le carcinome séreux de l’ovaire), valves cardiaques calcifiées et tendinite calcifiante. Il identifie également la calcification métastatique (déposition de calcium dans les tissus normaux due à l’hypercalcémie) dans le rein, le poumon et la muqueuse gastrique. Von Kossa ne détecte pas l’oxalate de calcium — pour l’oxalate, utiliser le Rouge Alizarine S à pH 4,0 ou la lumière polarisée (les cristaux d’oxalate sont biréfringents).

Rouge Alizarine S pour le Calcium

Le Rouge Alizarine S forme un précipité orange-rouge avec les ions calcium à pH alcalin (4,0-4,5). Il est plus spécifique pour le calcium que Von Kossa et détecte à la fois le phosphate de calcium et l’oxalate de calcium. Le Rouge Alizarine est utilisé pour identifier les dépôts de calcium dans les tissus mous, la calcification vasculaire et la néphrocalcinose. C’est également la coloration standard pour identifier le calcium dans les coupes histologiques d’os et de dents.

Colorations de la Bilirubine et de la Bile

La coloration de Fouchet (acide trichloroacétique et chlorure ferrique) oxyde la bilirubine en biliverdine verte, puis en couleur vert émeraude de la bile. Elle est utilisée pour identifier la cholestase intrahépatique et extrahépatique dans les biopsies hépatiques et les thrombi biliaires dans les canalicules. La coloration de Hall (Van Gieson avec Fouchet) colore simultanément la bile (vert/bleu) et le collagène (rouge). Le pigment biliaire doit être distingué de la lipofuscine (pigment d’âge) et de l’hémosidérine — Perls colore le fer en bleu et le PAS colore la lipofuscine de manière variable.

Décoloration de la Mélanine

La mélanine est un pigment brun-noir endogène qui peut obscurcir les détails cellulaires et l’interprétation IHC. La décoloration de la mélanine (permanganate de potassium suivi d’acide oxalique) élimine la mélanine sans endommager la morphologie tissulaire ni l’antigénicité, permettant l’évaluation des détails cellulaires sous les dépôts de mélanine denses. Les coupes décolorées peuvent être utilisées pour l’IHC après optimisation du protocole.

Contrôle Qualité

Chaque coloration spéciale nécessite des contrôles positifs appropriés réalisés simultanément : tissu contenant de l’amyloïde (Rouge Congo), foie surchargé en fer (Perls’), artère calcifiée (Von Kossa) et foie coloré par la bile (Fouchet). L’échec du contrôle invalide la série. Les procédures de dépannage standard s’appliquent — si les contrôles sont faibles, vérifier la fraîcheur des réactifs, le pH et les temps d’incubation.