Les tests de sensibilité aux antimicrobiens (AST) sont essentiels en microbiologie clinique pour sélectionner une antibiothérapie appropriée et surveiller les tendances en matière de résistance. Il détermine si un isolat bactérien est sensible, intermédiaire ou résistant à des agents antimicrobiens spécifiques.

Méthode de diffusion sur disque (Kirby-Bauer)

Des disques de papier filtre imprégnés de concentrations standardisées d’antibiotiques sont placés sur une plaque de gélose inoculée avec l’organisme test à une turbidité définie (norme McFarland 0,5). Après 16 à 24 heures d’incubation, les zones d’inhibition sont mesurées en millimètres et comparées aux tableaux de points d’arrêt CLSI ou EUCAST. Le résultat est signalé comme sensible (S), intermédiaire (I) ou résistant (R), la taille de la zone étant inversement corrélée à la concentration minimale inhibitrice (CMI). Cette méthode est simple, peu coûteuse et flexible (n’importe quel disque d’antibiotique peut être testé), mais elle ne convient pas aux organismes à croissance lente ou exigeants et est qualitative plutôt que quantitative.

Méthodes de dilution du bouillon

La microdilution en bouillon est réalisée dans des plaques de microtitration à 96 puits avec des dilutions en série de deux fois d’antibiotiques dans un bouillon Mueller-Hinton. Chaque puits est inoculé avec environ 5x10^5 CFU/mL, et la CMI est la concentration d’antibiotique la plus basse qui inhibe la croissance bactérienne visible après 16 à 20 heures d’incubation. La macrodilution en bouillon utilise le même principe dans les tubes à essai et convient à un plus petit nombre d’isolats. Les valeurs CMI fournissent des données quantitatives utiles pour l’analyse pharmacocinétique/pharmacodynamique (PK/PD) et la détection de résistances de faible niveau.

Dilution sur gélose

Des plaques de gélose contenant des dilutions en série d’antibiotiques sont inoculées avec une suspension bactérienne standardisée à l’aide d’un réplicateur (inoculateur multipoint Steers ou Denley). La CMI est lue comme la concentration la plus faible qui inhibe complètement la croissance, et plusieurs isolats (jusqu’à 36) peuvent être testés simultanément sur une seule plaque. Cette méthode est considérée comme la norme de référence pour la détermination de la CMI, notamment pour les organismes exigeants et les anaérobies.

Diffusion de gradient (Etest)

Une bandelette de plastique avec un gradient d’antibiotique continu prédéfini d’un côté et une échelle de lecture de la CMI de l’autre est placée sur une plaque de gélose inoculée. Après incubation, une zone elliptique d’inhibition coupe la bandelette à la valeur CMI, lue directement sur l’échelle. Cette méthode combine la commodité de la diffusion sur disque avec des données quantitatives de CMI et est utile pour les isolats uniques ou lorsque la dilution en bouillon n’est pas pratique.

Systèmes automatisés

Vitek 2 (bioMérieux), BD Phoenix et MicroScan WalkAway automatisent l’AST en utilisant une microdilution en bouillon miniaturisé dans des panels exclusifs avec détection de croissance par turbidité ou fluorescence. Les résultats sont généralement disponibles en 4 à 12 heures, ce qui est nettement plus rapide que les méthodes manuelles. Les systèmes automatisés incluent des règles expertes intégrées pour détecter les modèles de résistance inhabituels et suggérer des actions correctives.

Tests spécialisés

La détection des bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE) utilise un test combiné sur disque avec du céfotaxime et de la ceftazidime avec et sans acide clavulanique ; une augmentation ≥5 mm du diamètre de la zone confirme la production de BLSE. La détection des carbapénémases est effectuée à l’aide de la méthode d’inactivation du carbapénème modifié (mCIM) et du CIM modifié par EDTA (eCIM) pour distinguer les sérine et métallo-carbapénémases. La résistance inductible à la clindamycine (test D) consiste à placer les disques d’érythromycine et de clindamycine à 15-20 mm l’un de l’autre ; l’aplatissement de la zone de clindamycine (en forme de D) indique une résistance inductible au macrolide-lincosamide-streptogramine B (MLSB). La détermination de la CMI de vancomycine par microdilution en bouillon ou Etest est préférable pour détecter S. aureus intermédiaire à la vancomycine (VISA) et le VISA hétérogène (hVISA).

Interprétation et pertinence clinique

Les points d’arrêt cliniques sont établis par le CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) et l’EUCAST (Comité européen sur les tests de sensibilité aux antimicrobiens) sur la base des distributions de CMI, des données PK/PD et des résultats cliniques. Un résultat Susceptible (S) indique une forte probabilité de succès thérapeutique avec un dosage standard ; Résistant (R) indique une forte probabilité d’échec thérapeutique ; et Intermédiaire (I) indique une efficacité incertaine, nécessitant potentiellement des doses plus élevées ou des voies alternatives. Les résultats de l’AST guident une thérapie ciblée, réduisant l’utilisation d’antibiotiques à large spectre et ralentissant le développement de résistances. Les données AST cumulatives (antibiogrammes) sont utilisées pour l’épidémiologie locale, les décisions relatives aux formulaires et le contrôle des infections.